[发明专利]一种牛虻抗血栓酶kfpase的复性方法

摘要

本发明涉及牛虻抗血栓酶kfpase的高效复性方法，对重组表达而不具有生物活性的蛋白质进行了高效快速的复性。基本过程为将变性蛋白吸附到离子交换柱上，然后逐渐降低变性剂的浓度，使蛋白在这个过程中逐渐复性，正确折叠而形成天然活性蛋白。最后通过复性液将复性蛋白洗脱下来。本发明的方法不仅操作简便，便于大规模的应用，而且可以获得高纯度的蛋白并保持很高的蛋白回收率。

主权项

一种牛虻抗血栓酶kfpase的复性方法，其包括如下步骤：(1)柱平衡：用流动相I平衡常规离子交换层析介质，其中流动相I为尿素6‑8mol/L，三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris‑HCl)20‑50mmol/L，pH 8.0‑9.5，L‑半胱氨酸1‑3mmol/L，L‑胱氨酸0.2‑0.6mmol/L；(2)变性蛋白的吸附：用含5‑30mmol/L还原剂的6‑8mol/L尿素的变性缓冲液溶解包涵体，吸附到流动相I平衡的离子交换层析柱上；(3)变性蛋白的柱上复性：将步骤(2)中被吸附的蛋白用流动相I冲洗0‑5个柱体积，流动相II冲洗20个柱体积，冲洗流速为0.1‑2ml/min，使蛋白质在柱上逐渐形成天然结构，其中流动相II为三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris‑HCl)20‑50mmol/L，pH 8.0‑9.0，L‑半胱氨酸1‑3mmol/L，L‑胱氨酸0.2‑0.6mmol/L；(4)复性蛋白洗脱：将步骤(3)中蛋白质用流动相III洗脱0‑5个柱体积；其中流动相III为三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris‑HCl)20‑50mmol/L，pH 8.0‑9.5，L‑半胱氨酸1‑3mmol/L，L‑胱氨酸0.2‑0.6mmol/L，L‑精氨酸0.2‑1mol/L。