[发明专利]用于检测肺炎支原体抗体的方法、检测用的试剂盒及其制备方法

摘要

本发明涉及生物学技术领域，具体一种检测肺炎支原体抗体的方法、采用此方法进行检测的试剂盒，以及该试剂盒的制备方法，将抗人IgM与抗人IgG分别固定在膜上，加入待检血清，待检血清中的肺炎支原体抗体和固定到膜上的抗人IgM与抗人IgG结合后，加入酶标记肺炎支原体抗原溶液，最后加入显色液显色显示结果。本发明可使酶标肺炎支原体抗原的过程快速高效，延长试剂盒的保质期，提高检测灵敏度，降低试剂盒成本。

主权项

一种用于检测肺炎支原体抗体的方法，其特征在于：将抗人IgM与抗人IgG分别固定在膜上，加入待检血清，待检血清中的肺炎支原体抗体和固定到膜上的抗人IgM与抗人IgG结合后，加入酶标记肺炎支原体抗原溶液，最后加入显色液显色显示结果；所述酶标记肺炎支原体抗原溶液采用辣根过氧化物酶标记肺炎支原体抗原溶液，并采用以下步骤制备：（1）将1g辣根过氧化物酶溶于25ml～30ml的0.01M磷酸盐缓冲液中，加入70～85mg乙二胺，用0.1M盐酸将pH值调节至5.0，所得溶液再与115～125mg1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐混合，室温振荡反应后，采用0.01M磷酸盐缓冲液对所得溶液进行透析，制得氨基化辣根过氧化物酶溶液；（2）将步骤（1）制得的溶液配制成1ml、浓度为5～5.2mg/ml的氨基化辣根过氧化物酶溶液，再向所得溶液内加入60～85μl交联剂，混匀后于室温下反应25～35min；（3）将所述反应物加入截留分子量为10K的超滤管，并对反应物进行离心处理8～12min，再以0.01M的磷酸盐缓冲液复溶滞留结合物至1ml，再以同样离心力离心8～12min，以除去过量的交联剂，并再次复溶滞留物至1ml；（4）加入700～900μl浓度为1.6mg/ml的肺炎支原体抗原溶液，并于室温下反应25～35min；（5）使步骤（4）制得的溶液通过SephadexG‑200层析柱，收集第一峰的产物，即为酶标肺炎支原体抗原溶液。