[发明专利]人凝血因子Ⅸ突变体毕赤酵母表达载体及构建方法和应用无效
| 申请号： | 201210569965.3 | 申请日： | 2012-12-25 |
| 公开（公告）号： | CN103060366A | 公开（公告）日： | 2013-04-24 |
| 发明（设计）人： | 张同存;周俊;戴永刚;王震宇;吴尘宇;成采莲;唐文心 | 申请（专利权）人： | 武汉科技大学 |
| 主分类号： | C12N15/81 | 分类号： | C12N15/81;C07K14/745;C12R1/84 |
| 代理公司： | 武汉宇晨专利事务所 42001 | 代理人： | 王敏锋 |
| 地址： | 430081 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明公开了人凝血因子Ⅸ毕赤酵母表达载体及构建方法和应用，其步骤是：根据hFIX基因序列，用RT-PCR技术从人肝细胞中中克隆出hFIX全长cDNA序列，构建用于毕赤酵母表达的融合了酵母α-factor信号肽和全长hFIX序列的酵母表达质粒pPIC9K-hFIX。继而构建酵母表达质粒pPICZαA-hFIX，在此基础上构建四种酵母菌hFIX高活性突变体。得到的hFIX酵母表达载体凝血活性明显高于标准hFIX。其中一种突变体经50L中试发酵研究，蛋白纯化产物分泌表达量为702mg/L，为以后低成本产业化生产治疗B型血友病的高效hFIX产品打下了良好的基础。 | ||
| 搜索关键词： | 凝血 因子 突变体 酵母 表达 载体 构建 方法 应用 | ||
【主权项】：
一种分离重组的质粒pPICZαA‑hFⅨ‑R338A，其序列为SEQ ID NO.20所示。
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