[发明专利]用于快速检测线粒体内ATP的荧光共振体系的制备方法

摘要

用于快速检测线粒体内ATP的荧光共振体系的制备方法，包括以下步骤：步骤一：提供一种Cy3荧光标记的ATP适配体和MTS序列；步骤二：将QDs与ATP适配体互补链和MTS进行偶联反应，得到QDs分子探针，QDs为羧基表面水溶性量子点（COOH-QDs），浓度为1uM；步骤三：将步骤二得到的QDs分子探针与Cy3荧光标记的ATP适配体反应，得到ATP适配体与互补链相互作用后的荧光共振体系，本发明利用了ATP与其配体链(aptamer)特异性结合的特点，结合能量共振转移技术，实现了对ATP的快速检测；并且通过特异的穿膜多肽-线粒体定位融合序列（MTS)实现了对线粒体内ATP浓度变化的实时监控，为ATP的细胞内、体内检测监控提供了一种新的方法。

主权项

用于快速检测线粒体内ATP的荧光共振体系的制备方法，包括以下步骤：步骤一：准备一种Cy3荧光标记的ATP‑aptamer适配体以及MTS融合多肽，ATP‑aptamer适配体为3’‑Cy3修饰的DNA适配体，其序列信息为：5’‑ACCTGGGGGAGTATTGCGGAGGAAGGT‑Cy3‑3’，MTS融合多肽序列信息为：（a）YGRKKRRQRRR、（b）YARAAARQARA、（c）YGRKKRRQRRRMLSALARPVGAALRRSFSTSAQNN或（d）YARAAARQARAMLSALARPVGAALRRSFSTSAQNN；步骤二：将QDs与ATP适配体互补链、MTS融合多肽进行偶联反应，得到线粒体定位的QDs分子探针，QDs为羧基表面水溶性量子点（COOH‑QDs），浓度为1uM，ATP‑aptamer适配体互补链为5’‑NH2‑(CH2)12修饰的DNA，其序列信息为：5’‑NH2‑(CH2)12‑ACCTTCCTCCGCAATACTCCCCCAGGT‑3’（ProbeDNA，DNAp）；步骤三：将步骤二得到的线粒体定位的QDs分子探针与Cy3荧光标记的ATP‑aptamer适配体反应，得到ATP‑aptamer适配体与互补链相互作用后的荧光共振体系，步骤四：通过将上述步骤三得到的荧光共振分子探针体系与目标细胞在37度进行孵育，半小时后，利用培养基清洗未进入细胞内的分子探针体系，并通过共聚焦显微镜检测荧光共振分子探针体系的细胞内定位以及细胞内线粒体ATP浓度的变化。