[发明专利]新型腈水合酶

摘要

本发明的目的为提供一种具有新型突变位点的腈水合酶的氨基酸序列及其基因的碱基序列，另外本发明的目的还在于提供一种对具有腈水合酶活性的酶进行修饰的方法。作为解决目前问题的方法，提供了在来源于嗜热假诺卡氏菌JCM3095、由2种异源亚单位构成的腈水合酶中引入新型突变而得到的突变体的氨基酸序列及其基因的碱基序列。而且，通过确定腈水合酶的立体结构/氨基酸序列中作为修饰对象的区域，并对与形成所述区域的氨基酸残基对应的氨基酸序列中的氨基酸进行置换、插入、缺失等改变从而修饰腈水合酶。通过本发明，能够比现有技术更高效率地将腈化合物转化为对应的酰胺化合物。

主权项

一种腈水合酶突变体，是具有由序列表1的序列号1的氨基酸序列构成的α亚单位及由序列表1的序列号2的氨基酸序列构成的β亚单位的腈水合酶的至少一个以上的氨基酸置换为其它氨基酸而得到的腈水合酶突变体，其中 所述腈水合酶具有作为底物的腈化合物从腈水合酶外部进入活性中心时、或作为产物的酰胺化合物从活性中心移至腈水合酶外部时所述底物或所述产物通过的孔穴， 所述腈水合酶突变体包含下述突变，所述突变是选自由位于所述孔穴形成的区域中的、所述序列号1的氨基酸序列的第36及48位的氨基酸及所述序列号2的氨基酸序列的第32、33、37、40、41、46、48、51、61、72、112、118、127位氨基酸构成的组中的任一氨基酸置换为下述(i)～(xv)所示的其它氨基酸而得到的突变， (i)所述序列号1的氨基酸序列的第36位氨基酸置换为其它氨基酸时，置换为Met、Ser、Ala、Gly或Trp， (ii)所述序列号1的氨基酸序列的第48位氨基酸置换为其它氨基酸时，置换为Gln或Glu， (iii)所述序列号2的氨基酸序列的第32位氨基酸置换为其它氨基酸时，置换为Gly， (iv)所述序列号2的氨基酸序列的第33位氨基酸置换为其它氨基酸时，置换为Val或Met， (v)所述序列号2的氨基酸序列的第37位氨基酸置换为其它氨基酸时，置换为Thr、Ala、Leu、Ile或Val， (vi)所述序列号2的氨基酸序列的第40位氨基酸置换为其它氨基酸时，置换为Val、Leu或Ile， (vii)所述序列号2的氨基酸序列的第41位氨基酸置换为其它氨基酸时，置换为Glu、Thr、Ala、Leu、Tle或Val， (viii)所述序列号2的氨基酸序列的第46位氨基酸置换为其它 氨基酸时，置换为Gly、Tyr、Leu、Lys或Asp， (ix)所述序列号2的氨基酸序列的第48位氨基酸置换为其它氨基酸时，置换为Gly、Ala、Val、Ser、Thr或Arg， (x)所述序列号2的氨基酸序列的第51位氨基酸置换为其它氨基酸时，置换为Ala或Val， (xi)所述序列号2的氨基酸序列的第61位氨基酸置换为其它氨基酸时，置换为Val、Leu、Gly、Ser、Thr或Trp， (xii)所述序列号2的氨基酸序列的第72位氨基酸置换为其它氨基酸时，置换为Phe， (xiii)所述序列号2的氨基酸序列的第112位氨基酸置换为其它氨基酸时，置换为Val或Ile， (xiv)所述序列号2的氨基酸序列的第118位氨基酸置换为其它氨基酸时，置换为Ala、Leu、Ile或Val， (xv)所述序列号2的氨基酸序列的第127位氨基酸置换为其它氨基酸时，置换为Ala、Val或Ser。