[发明专利]一种云芝抗病品种室内筛选的方法

摘要

一种云芝抗病品种室内筛选的方法，属于生物工程和食药用菌技术领域。本发明首先对云芝确定两种主要病原菌细菌、青霉菌，引进不同的云芝菌株，对细菌、青霉菌抗病能力进行筛选，建立云芝抗病能力筛选的模式；由于食用菌的细菌及霉菌性病害主要通过病原菌分泌的毒素来抑制食用菌菌丝生长，造成食用菌产生各种病害；还有就是食用菌菌丝的生长与病原菌菌丝的生长强弱之间的竞争来确定食用菌抑制病原菌的能力。因此，通过PDA平板培养实验，利用细菌、青霉菌的发酵产物对不同云芝生长的抑制能力与对照菌株进行对比，得出不同云芝菌株的平均抗性，以及不同的云芝菌株生长速度，建立评分体系，经过综合评判，室内筛选出抗病能力强的菌株，最后经云芝实验进一步确定。

主权项

一种云芝抗病品种室内筛选的方法，其特征在于： 以细菌、青霉菌为病原菌，对云芝进行抗病品种筛选；通过引进市售的8种不同的云芝菌株进行抗病能力测定，这8种云芝菌株分别命名为：SYZ 1、SYZ 2、SYZ 3、SYZ 4、SYZ 5、SYZ 6、SYZ 7、SYZ 8；通过对病原菌的液体发酵培养，病原菌的发酵产物离心得到上清液，然后利用细菌滤膜进行过滤得到无菌滤液，得到的无菌滤液再进行云芝菌株的平板涂布培养实验，利用打孔接种，通过PDA平板培养，利用云芝菌株菌圈生长的大小与未涂布病原菌发酵产物滤液的PDA平板培养试验对照菌株菌圈生长的大小进行比较，得出平均抗性；通过对不同云芝的生长速度测定，根据不同云芝的生长速度、对细菌的平均抗性、对青霉菌的平均抗性，建立综合评分体系，以确定不同云芝菌株的抗病能力，筛选出最佳抗病云芝菌株；筛选步骤为：（1）实验方法的建立：细菌、青霉菌的发酵产物通过离心得到上清液，在45℃进行旋转蒸发浓缩，以确保发酵产物的生理活性不被破坏，然后利用细菌滤膜进行过滤，得到的无菌滤液再进行云芝菌株的平板涂布培养实验，要求PDA平板倒好后放置3天或者用无菌风吹干，以便滤液能被平板吸收及均匀的涂布平板；（2）确定试验的病原菌发酵产物无菌滤液的浓度：利用两种云芝菌株对不同浓度的病原菌发酵产物无菌滤液进行抗病抑制试验，通过试验效果以确定最佳试验的病原菌发酵产物无菌滤液的浓度；（3）确定发酵产物无菌滤液的涂布量：在确定病原菌发酵产物无菌滤液的浓度的基础上，再通过平板涂布滤液量的大小对两种云芝菌株所产生的抑制试验效果，确定发酵产物无菌滤液的涂布量；（4）确定平均抗性：8种不同的云芝菌株在确定的细菌、青霉菌的发酵产物无菌滤液浓度、确定的平板涂布量的条件下，利用打孔接种，通过PDA平板培养，利用云芝菌株菌圈生长的大小与未涂布发酵产物无菌滤液的PDA平板培养试验对照菌株菌圈生长的大小进行比较，得出平均抗性：抗性水平=（试验菌圈直径∕对照菌圈直径）×100%；（5）抗病性聚类分析：对不同云芝菌株的抗性水平进行方差分析，再进行不同云芝菌株的抗病性聚类分析得出高抗菌株；（6）生长速度聚类分析：通过PDA平板培养试验对8种不同云芝菌株的生长速度进行测定：通过8种不同云芝菌株的生长速度的聚类分析得出生长速度快的云芝菌株；（7）综合评分：根据不同云芝的生长速度、对细菌的平均抗性、对青霉菌的平均抗性，建立综合评分体系，以确定不同云芝菌株的抗病能力，筛选出最佳抗病云芝菌株；（8）通过云芝菌株的栽培试验以最终确定筛选出的云芝菌株的抗病能力。