[发明专利]一种检测人蛋白C活性的方法

摘要

本发明公开了一种检测人蛋白C活性的方法，用于检测人蛋白Ｃ活性的发色底物的方法，包括：激活和显色:同时进行，所用的样品稀释液为pH7.2-8.4的20-50mM的Tris缓冲液或Hepes缓冲液，从而使稀释后的样品pH在7-8之间，与生理情况下血浆的pH相近，进而保证检测的准确性；加入的人蛋白Ｃ激活剂的浓度为0.05-0.4IU/ml，显色底物的浓度为0.05-2mg/ml，保证人蛋白Ｃ能完全反应；本发明的有益效果是，将传统的检测人血浆PC的发色底物法过程中的两个单独的“激活”和“显色”过程合并为一个“激活和显色”步骤，大大简化了操作步骤，使操作时间降为传统的1/2～2/3,减少造成人为失误的可能性，检测准确性与灵敏度达到传统检测方法要求。

主权项

一种检测人蛋白Ｃ活性的方法，其特征是用于检测人蛋白Ｃ的发色底物的方法，包括：①激活和显色: 将用样品稀释液稀释后的样品10‑50μL加入96孔板中，然后依次加入约3倍体积的人蛋白Ｃ的特异性的激活剂——一种提取自蝮蛇蛇毒中的蛋白质和活化的人蛋白Ｃ的特异性的显色底物——一种连接对硝基苯胺显色基团的三肽化合物，然后在37℃水浴孵育8‑20分钟;②终止:加入约3倍待测样品体积的酸性终止液，终止反应；在“终止”过程中加入的酸性终止液的体积百分浓度为20‑50%的醋酸；③读数:在405nm波长读取吸光值。