[发明专利]一种耐高温酶法合成菊粉的方法

摘要

本发明涉及一种耐高温酶法合成菊粉的方法，以蔗糖为主要原料，利用筛选得到的高产耐高温菊粉合成酶系的出芽胞杆菌TKB28菌株为发酵菌种生产耐高温菊粉合成酶，然后再利用耐高温菊粉合成酶根据需要生产不同DP值菊粉，包括培养出芽胞杆菌生产耐高温菊粉合成酶、合成菊糖反应及除杂与制粉三个步骤。本发明除了能解决传统植物提取法生产菊粉之原料产量与品质的不可控性弊端外，还解决了制约酶法生产菊粉产业化应用的菊粉合成酶酶活较低且耐高温性差，致使菊粉合成率较低，生产成本过高的技术瓶颈。

主权项

一种耐高温酶法合成菊粉的方法，其特征在于：利用出芽胞杆菌为发酵菌种生产耐高温菊粉合成酶，然后再利用耐高温菊粉合成酶根据需要生产不同DP值菊粉，该方法的步骤为：⑴、培养出芽胞杆菌生产耐高温菊粉合成酶：发酵原料经高温灭菌后打入种子罐及发酵罐中，出芽胞杆菌TKB28菌株经过摇瓶、种子罐的二级接种后，按5%接种量接入发酵罐中，通入无菌空气搅拌条件下，37℃恒温发酵16小时左右，然后通过离心将菌体和发酵液分离，通过分子量20000的超滤膜浓缩菊粉合成酶溶液，测定所得菊粉合成酶浓缩液的酶活；⑵、合成菊糖反应：在底物浓度为20%的蔗糖溶液、温度为70℃条件下，按1‑1.5U/mL的加入量加入高温菊粉合成酶，初期pH值5.5，保温8小时后当蔗糖浓度小于5%时，调节pH为7.0，同时通过流加蔗糖使蔗糖浓度维持在5‑10%，12小时后停止流加；当反应进行4小时后溶液中主要为DP值9－12的菊糖和葡萄糖及少量蔗糖，当12小时后反应结束，溶液中主要为DP值21－25的菊糖和葡萄糖；⑶、除杂与制粉：反应结束后的溶液通过微滤、离子交换树脂除去料液中的少量不溶物、灰分、和色素，然后通过纳滤膜去除葡萄糖及少量蔗糖，使菊粉的纯度在95%以上，最后通过喷雾干燥制得高纯度菊粉。