[发明专利]突变分析

摘要

本发明描述了一种用于分析遗传突变、特别是单核苷酸多态性(SNPs)和／或体细胞突变的方法，以及与另一种形式相比优先扩增一种等位基因形式的方法。所述方法使用寡核苷酸探针和扩增引物，其中所述寡核苷酸探针与第一等位基因杂交的解链温度(Tm)低于其与第二等位基因杂交的解链温度，所述扩增引物在所述寡核苷酸探针结合位点侧翼并且以比所述探针与所述第一等位基因的Tm高的Tm与样品结合。扩增反应可以在所述探针优先与第二等位基因杂交的温度进行，由此扩增所述第一等位基因。扩增的序列可以使用与扩增过程中作为阻断探针相同的探针进行检测。

主权项

优先扩增并检测具有至少第一和第二等位基因的基因座的第一等位基因的方法，所述方法包括：a)提供反应混合物，所述反应混合物包含：i)样品，其包含代表至少待扩增基因座的核酸；ii)寡核苷酸探针，其与第一等位基因杂交的解链温度(Tm)低于其与第二等位基因杂交的解链温度；iii)用于核酸扩增的寡核苷酸引物对，所述引物在所述寡核苷酸探针结合位点侧翼的第一和第二位点与样品中的核酸杂交；其中引物：样品的Tm高于探针：第一等位基因的Tm；b)将所述反应混合物保持在探针：第一等位基因的Tm与探针：第二等位基因的Tm之间的温度，以使所述探针优先与第二等位基因杂交；c)对所述反应混合物进行热循环扩增，所述扩增包括解链阶段、退火阶段和延伸阶段，其中所述延伸和退火阶段的温度在探针：第一等位基因的Tm与探针：第二等位基因的Tm之间，以使所述探针在这些阶段与第二等位基因杂交；由此扩增第一等位基因；和d)在等于或低于探针：第一等位基因的Tm的温度检测所述探针与所述样品的杂交；在更高的温度在等于或低于探针：第二等位基因的Tm检测所述探针与所述样品的杂交；并且比较二者；由此检测所扩增的第一等位基因。