[发明专利]用于基因组修饰的方法

摘要

本文中提供将一种或多种外源核酸整合入宿主细胞基因组的一个或多个选定靶位点的方法。在某些实施方案中，所述方法包括使宿主细胞基因组与一种或多种包含要整合入基因组靶位点的外源核酸的整合多核苷酸和能够在基因组靶位点附近或内部引起双链断裂的核酸酶接触。

主权项

一种用于将多数(n)外源核酸同时整合入宿主细胞基因组的多数(n)靶位点的方法，其中n为至少2，该方法包括：(a)使宿主细胞与下述各项同时接触：(i)所述要整合入宿主细胞基因组的多数外源供体核酸，其中x为自1至n变化的整数，且对于每个整数x，每种外源供体核酸(ES)_x包含第一同源区(HR1)_x和第二同源区(HR2)_x，其中(HR1)_x和(HR2)_x能够启动(ES)_x在所述宿主细胞基因组的选自所述多数(n)靶位点的靶位点(TS)_x处由宿主细胞介导的同源重组；和(ii)对于每个所述靶位点(TS)_x，能够在(TS)_x处切割的核酸酶(N)_x，于是所述切割导致(ES)_x在(TS)_x处的同源重组；并(b)回收宿主细胞，其中每种外源核酸(ES)_x已经在其选定靶位点(TS)_x处整合，其中所述回收以每1000、900、800、700、600、500、400、300、200、100、90、80、70、60、50、40、30、20、10、9、8、7、6、5、4、3、或2个筛选的发生接触的宿主细胞或其克隆群中回收一个的频率发生。