[发明专利]核酸酶底物

摘要

本发明涉及用于催化性核酸酶的核酸底物以及这些底物的使用方法。 1

主权项

1.一种用于催化性核酸酶的分离的多核苷酸底物，所述多核苷酸底物包括序列N₁‑N₂‑N₃‑N₄‑N₅‑N₆‑N₇‑N₈‑rR‑rY‑N₉‑N₁₀‑N₁₁‑N₁₂‑N₁₃‑N₁₄‑N₁₅，其中：

rR是嘌呤核糖核苷酸；

rY是嘧啶核糖核苷酸；

N₁‑N₁₅的每一个是核苷酸；

N₅‑N₁₃中的六个或更多个是胞嘧啶核苷酸；

N₉是胞嘧啶核苷酸；

嘧啶核糖核苷酸包括尿嘧啶；并且

N₉‑N₁₅中少于三个是鸟嘌呤核苷酸，

其中所述多核苷酸底物包括一个由SEQ ID NO：29‑30、72‑90或172‑175中的任一个所定义的序列，或由该序列组成。

2.根据权利要求1所述的分离的多核苷酸底物，其中N₅‑N₁₃中的七个或更多个是胞嘧啶核苷酸，并且该多核苷酸底物包括一个由SEQ ID NO：29、73、76‑80、82‑83、85‑90或172‑175中的任一个所定义的序列，或由该序列组成。

3.根据权利要求1所述的分离的多核苷酸底物，其中N₅‑N₁₃中的八个是胞嘧啶核苷酸，并且该多核苷酸底物包括一个由SEQ ID NO：76、77、80、83或87中的任一个所定义的序列，或由该序列组成。

4.根据权利要求1所述的分离的多核苷酸底物，其中N₄‑N₁₃中的七个或更多个是胞嘧啶核苷酸，并且该多核苷酸底物包括一个由SEQ ID NO：29、73、76‑83、85‑90或172‑175中的任一个所定义的序列，或由该序列组成。

5.根据权利要求1所述的分离的多核苷酸底物，其中N₈和N₉是胞嘧啶核苷酸，并且该多核苷酸底物包括一个由SEQ ID NO：73、76、77、79、83或87中的任一个所定义的序列，或由该序列组成。

6.根据权利要求1所述的分离的多核苷酸底物，其中N₉‑N₁₅中的一个是鸟嘌呤核苷酸或者都不是鸟嘌呤核苷酸，并且该多核苷酸底物包括一个由SEQ ID NO：29‑30、72‑75、77‑79、81‑90或174‑175中的任一个所定义的序列，或由该序列组成。

7.根据权利要求1所述的分离的多核苷酸底物，其中N₁‑N₁₅中的十一个、十二个、或多于十二个是嘧啶核苷酸，并且该多核苷酸底物包括一个由SEQ ID NO：29、72‑90或174‑175中的任一个所定义的序列，或由该序列组成。

8.根据权利要求7所述的分离的多核苷酸底物，其中N₁‑N₁₅中的十三个或十四个是嘧啶核苷酸，并且该多核苷酸底物包括一个由SEQ ID NO：29、73、76、81、86或174中的任一个所定义的序列，或由该序列组成。

9.根据权利要求1所述的分离的多核苷酸底物，其中N₁‑N₁₄中的十个或十一个是胞嘧啶核苷酸，并且该多核苷酸底物包括一个由SEQ ID NO：29、74‑76、81、86或87中的任一个所定义的序列，或由该序列组成。

10.根据权利要求1所述的分离的多核苷酸底物，其中N₁‑N₁₄中的十一个是胞嘧啶核苷酸，并且该多核苷酸底物包括一个由SEQ ID NO：29、74、75或87中的任一个所定义的序列，或由该序列组成。

11.根据权利要求1所述的分离的多核苷酸底物，进一步包括一种用于对该多核苷酸底物进行检测的可检测标记。

12.根据权利要求1所述的分离的多核苷酸底物，进一步包括一个可检测部分以及一个猝灭剂部分，其中该可检测部分提供的可检测效应可基于所述催化性核酸酶对该多核苷酸底物的修饰而增加或减少。

13.根据权利要求1所述的分离的多核苷酸底物，其中该嘌呤核糖核苷酸包括鸟嘌呤。

14.根据权利要求1所述的分离的多核苷酸底物，其中该嘌呤核糖核苷酸包括鸟嘌呤，并且该嘧啶核糖核苷酸包括尿嘧啶。

15.根据权利要求1所述的分离的多核苷酸底物，其中该底物的与所述催化性核酸酶结合的一个部分具有的解链温度是在50℃与90℃之间。

16.根据权利要求1所述的分离的多核苷酸底物，其中该底物的与所述催化性核酸酶结合的一个部分具有的解链温度是在50℃与65℃之间，或者在66℃与76℃之间。

17.根据权利要求1所述的分离的多核苷酸底物，其中该底物的与所述催化性核酸酶结合的一个部分具有的解链温度是在50℃与60℃之间，或者在68℃与76℃之间。

18.根据权利要求1所述的分离的多核苷酸底物，其中该底物的与所述催化性核酸酶结合的一个部分具有的解链温度是在52℃与58℃之间，或者在70℃与76℃之间。

19.根据权利要求1所述的分离的多核苷酸底物，其中该底物的与所述催化性核酸酶结合的一个部分具有的解链温度是在64℃与70℃之间，或者在72℃与76℃之间。

20.根据权利要求1所述的分离的多核苷酸底物，其中该底物的与所述催化性核酸酶结合的一个部分具有的解链温度是在70℃与75℃之间。

21.根据权利要求1所述的分离的多核苷酸底物，其中该底物的与所述催化性核酸酶结合的一个部分具有的解链温度为52℃、58℃、64℃、66℃、68℃、70℃、72℃或76℃。

22.根据权利要求1所述的分离的多核苷酸底物，其中所述催化性核酸酶是：

(a)一种多组分核酸酶，并且所述底物与所述多组分核酸酶的至少一个底物臂结合；或者

(b)一种DNA核酶。

23.一种包括如权利要求1至22中任一项所述的分离的多核苷酸底物的试剂盒。

24.根据权利要求23所述的试剂盒，进一步包括一种能够对所述多核苷酸底物进行催化修饰的催化性核酸酶。

25.一种试剂盒，该试剂盒包括如权利要求1至22中任一项所述的分离的多核苷酸底物以及多种寡核苷酸部分酶，这些寡核苷酸部分酶被设计为组装一种能够检测至少一种靶标的多组分核酸酶，其中所述多组分核酸酶能够对该多核苷酸底物进行催化修饰。

26.一种组装物，该组装物包括一种与如权利要求1至22中任一项所述的多核苷酸底物结合的固体载体。