[发明专利]确定芸苔中FAD3基因的接合性的方法

摘要

本公开内容部分涉及用于芸苔中fad-3c基因的检测和高通量接合性分析的端点PCR测定法。本公开内容部分涉及野生型DNA作为参照在确定接合性中使用的用途。这些和其它相关规程可以用于独特鉴定包含题述基因的芸苔系的接合性和品种。本公开内容还提供了用于例如从芸苔植物或种子的样品确定接合性的相关试剂盒。

主权项

一种用于确定包含fad‑3c基因的芸苔植物的接合性的方法，所述方法包括：自所述芸苔植物获得基因组DNA样品；通过使所述基因组DNA样品与第一引物和第二引物接触产生接触样品，其中所述第一引物优先结合在感兴趣的单核苷酸多态性位置上游的所述fad‑3c基因的区域，所述第二引物优先结合在感兴趣的单核苷酸多态性位置下游的所述fad‑3c基因的区域，其中所述第一引物和所述第二引物在受到聚合酶链式反应(PCR)条件处理时生成扩增子；使所述接触样品进行PCR条件处理，其中生成所述扩增子；容许第一荧光探针和第二荧光探针中每种于50‑70摄氏度的温度与所述扩增子杂交一段时间，所述第一荧光探针在所述感兴趣的单核苷酸多态性不存在于所述扩增子中时优先与所述扩增子杂交，所述第二荧光探针在所述感兴趣的单核苷酸多态性存在于所述扩增子中时优先与所述扩增子结合；在所述容许步骤中规定的时间段后提高所述温度；在提高步骤期间捕捉由所述第一和第二探针中每种产生的所述荧光；并确定所述芸苔植物的接合性，确定步骤包括比较由所述第一和第二探针中每种产生的所述荧光，其中主要反映纯合SNP阳性对照样品中产生的荧光的所述第一和第二探针的荧光指示所述感兴趣的单核苷酸多态性的存在，主要反映纯合SNP阴性对照样品中产生的荧光的所述第一和第二探针的荧光指示所述感兴趣的单核苷酸多态性的存在的缺乏，且主要反映杂合SNP阳性对照样品中产生的荧光的所述第一和第二探针的荧光指示所述芸苔植物包含含有所述感兴趣的单核苷酸多态性的第一等位基因和缺乏所述感兴趣的单核苷酸多态性的第二等位基因。