[发明专利]一种微藻利用碳酸钙碳源的检测与定量方法

摘要

本发明公开一种微藻利用碳酸钙碳源的检测与定量方法，分别添加两种δ13C值差异悬殊且晶型相同的碳酸钙粉末同时培养待测微藻，测定不同培养时间藻体的蛋白质含量和收获后藻体稳定碳同位素组成δ13C值；然后，利用起始藻体的蛋白质含量和δ13C值对收获时测定的藻体δ13C值进行校正，再利用两端元的同位素混合模型获取微藻利用来自于添加的碳酸钙碳源的份额；利用不同培养时间藻体的蛋白质含量数据和Redfield值，用指数生长方程拟合生物量随时间变化；最后，根据微藻利用添加的碳酸钙碳源的份额和生物量随时间变化的方程，计算出单位生物量的被考察微藻在单位时间内获取的碳酸钙碳源的量。

主权项

1.一种微藻利用碳酸钙碳源的检测与定量方法，其特征在于：它包括以下步骤：第一，选择两种δ¹³C值差值大于8 ‰且晶型相同的碳酸钙粉末作为同位素标记1和同位素标记2分别添加到培养液中来培养待测微藻，并测定起始的待测微藻的稳定碳同位素组成δ¹³C值和蛋白质含量N₀；碳同位素标记1的碳酸钙的δ¹³C值为δ_C1，碳同位素标记2的碳酸钙的δ¹³C值为δ_C2；起始的待测微藻的稳定碳同位素组成δ¹³C值为δ₀；第二，在培养过程中，测定各培养条件下不同培养时间微藻的蛋白质含量，待培养7至9天后，收获藻体，分别测定两种同位素标记的培养液培养的相对应的各培养条件下的、被考察微藻的稳定碳同位素组成δ¹³C的值δ^h_T1、δ^h_T2和蛋白质含量N₁、N₂；第三，利用起始藻体的蛋白质含量N₀和稳定碳同位素组成δ¹³C值δ₀与收获时微藻的蛋白质含量N_i，通过校正公式：δ^h_Ti=(N₀/N_i)δ₀+(1-N₀/N_i)δ_Ti对收获时测定的藻体δ¹³C值δ^h_Ti进行校正，计算出校正后的藻体δ¹³C值δ_Ti；第四，通过方程，计算出微藻各培养条件下利用添加的碳酸钙碳源的份额f_B；第五，计算不同培养时间不同培养条件下两种同位素标记的培养液培养的微藻蛋白质含量的平均值，利用指数生长方程拟合微藻的蛋白质计量的生物量随时间变化,得出各培养条件下的、被考察微藻生物量Q_T随时间T变化的方程，Q_T=q+ae^bT,其中Q_T：代表在时间T时以蛋白质计量的微藻生物量，q、a和b：代表拟合参数，e： 2.7183；b的生物学意义为单位生物量的被考察微藻在单位时间内增加的生物量；第六，依据收获时各培养条件下微藻利用添加的碳酸钙碳源的份额f_B、单位生物量的被考察微藻在单位时间内增加的生物量b和换算因子F，利用公式d= F·b·f_B，计算出单位质量生物量的被考察微藻在单位时间内获取的碳酸钙碳源的量d。