[发明专利]一种“妃子笑”荔枝品种离体再生的方法

摘要

本发明公开了荔枝妃子笑品种离体再生的方法。该方法，包括下述步骤：1)以荔枝妃子笑品种花药为外植体，进行愈伤组织诱导培养，筛选获得胚性愈伤组织；培养基为MS+3mg/L 2，4-D+0.5mg/L BA+0.5mg/L NAA+30g/L糖；2)对胚性愈伤组织进行体细胞胚诱导培养得到体细胞胚；培养基为MS+0.1mg/L NAA+5mg/L KT+100mg/L肌醇+50g/L蔗糖；3)对体细胞胚进行成熟培养获得成熟的细胞胚，培养基为MS+50ml/L椰乳+60g/L蔗糖；4)对成熟的细胞胚进行再生培养，培养基为MS+30g/L蔗糖+7g琼脂。本发明建立了‘妃子笑’荔枝品种离体再生植株的方法，并获得了很高的诱导率，提高了生产效率，降低了成本，为荔枝品种改良和生物技术育种奠定了良好的基础。

主权项

荔枝妃子笑品种离体再生的方法，包括下述步骤：1)以荔枝妃子笑品种花药为外植体，将外植体接种于诱导培养基进行愈伤组织诱导培养，筛选获得胚性愈伤组织；所述愈伤组织诱导培养基为MS培养基的基础上添加终浓度为3mg/L的2，4‑D、终浓度为0.5mg/L的6‑BA、终浓度为0.5mg/L的NAA、终浓度为30g/L的蔗糖的固体培养基或者MS培养基的基础上添加终浓度为1mg/L的2，4‑D、终浓度为1mg/L的6‑BA、终浓度为1mg/L的NAA、终浓度为30g/L的蔗糖的固体培养基；所述愈伤组织诱导培养的条件是23‑27℃暗培养15‑30天；2)对步骤1)获得的胚性愈伤组织进行体细胞胚诱导培养得到体细胞胚；所述体细胞诱导培养的培养基为MS培养基的基础上添加终浓度为5mg/L的KT、终浓度为0.1mg/L的NAA、终浓度为100mg/L的肌醇、终浓度为50g/L的蔗糖的固体培养基或者MS培养基的基础上添加终浓度为5mg/L的ZT、终浓度为0.1mg/L的NAA、终浓度为100mg/L的肌醇、终浓度为50g/L的蔗糖的固体培养基；所述体细胞诱导培养的条件是23‑27℃暗培养30‑45天；3)对步骤2)获得的体细胞胚进行成熟培养获得成熟的细胞胚；所述成熟培养的培养基为50ml/L的椰乳、终浓度为60g/L的蔗糖的固体培养基；所述成熟培养的条件为温度23‑27℃，光照培养；4)对步骤3)获得的成熟的细胞胚进行再生培养，再生培养的培养基为在MS培养基的基础上添加终浓度为30g/L的蔗糖的固体培养基；再生培养的培养条件为温度23‑27℃，光照培养。