[发明专利]一种转精氨酸酶基因玉米育种方法

摘要

本发明公开了一种转精氨酸酶基因玉米育种方法，由玉米中克隆ZmArg基因，采用农杆菌介导法转化玉米极早熟自交系，创造高产玉米新种质。采用本发明的方法能高效的将外源ZmArg基因已转入玉米自交系中，并且成功表达，在玉米生长的各个时期的精氨酸酶水平都有所提高，穗粗、粒长、粒宽等产量性状也有相应的增加。

主权项

一种转精氨酸酶基因玉米育种方法，其包括如下步骤：（1）以pCAMBIA5300‑ubi‑Tnos为基础载体，去除原来载体的HPT基因，换上了来自NK603中35S驱动的CP4EPSPS基因，将精氨酸酶基因ZmArg、异戊烯基转移酶基因ZmIPT2和细胞壁转化酶基因ZmMn1插入多克隆位点SmaⅠ之后，构建单子叶植物超量表达载体；（2）单子叶植物超量表达载体经三亲杂交法将目的基因转移至农杆菌，挑取单菌落，进行PCR鉴定得到目标农杆菌；（3）试验材料的准备:自交系玉米种子分别在60‑80%酒精浸泡40s‑50，0.05‑0.15%升汞消毒8‑12min，无菌水冲洗，然后将种子浸泡在无菌水中，置于37℃水浴中4～5h；（4）农杆菌侵染萌动胚：在超净台里用解剖刀在玉米萌动胚的生长点处划开1～3mm的口子，放入制备好的农杆菌工程菌液中浸染芽尖，26‑30℃，200‑240r/min振荡20‑28h，然后把种子放在MS固体培养基上共培养2‑4d；（5）移栽：用清水洗掉菌体，转入2‑6mg/LPPT的选择培养基中培养7‑10天，除去矮化、生长缓慢的植株，选择正常的移栽到装有灭菌蛭石的营养钵中；（6）在转化苗长到3‑4叶期时，均匀喷洒合适浓度的草甘膦水溶液行筛选，存活植株长到5‑6叶期时移栽到田间收获目标玉米种。