[发明专利]一种结核分枝杆菌TB检测试剂盒

摘要

本发明提供一种结核分枝杆菌TB检测试剂盒，所述试剂盒中包括核酸释放剂和PCR反应液，所述核酸释放剂包含莎梵婷（surfactin）0.01~0.5mM/L，氯化钾20~300mM/L，十二烷基磺酸钠0.01~2%和乙醇0.05~1%；所述PCR反应液中包含用于靶多核苷酸扩增的上游引物、下游引物和用于靶多核苷酸检测的探针。使用本发明试剂盒中的核酸释放剂释放核酸的方法与煮沸法的检测结果没有明显差异，而本发明中提取核酸时采用强烈的蛋白变性剂，快速破坏病原体外壳蛋白结构，释放出病原体核酸，无需加热即可完成DNA的释放和提取；本发明试剂盒检测TB的灵敏度可达400copies/ml，定量线性范围为400~4.00E+09copies/ml；应用该试剂盒可以对痰液等未知样本中的TB‑DNA进行快速准确的检测，为诊断TB感染提供可靠的实验依据。

主权项

一种结核分枝杆菌TB检测试剂盒，所述试剂盒中包括核酸释放剂和PCR反应液，所述核酸释放剂包含莎梵婷0.01～0.5mmol/L，氯化钾20～300mmol/L，十二烷基磺酸钠0.01～2％和乙醇0.05～1％；所述PCR反应液中包含用于靶多核苷酸扩增的上游引物、下游引物和用于靶多核苷酸检测的探针，且用于靶多核苷酸的上游引物序列为5'‑ACGGATAGGGGATCTCAGTACAC‑3'，用于靶多核苷酸的下游引物序列为5'‑CGTCTCGGCTAGTGCATTGTC‑3'，用于靶多核苷酸的探针序列为5'‑FAM‑TTCCGACCGCTCCGACCGAC‑BHQ1‑3'；所述试剂盒中还包括内标，所述内标序列为5’‑GTGTCTGCGGCGTTTTATCATCTTCCTCTGTCATCCAGTGCAAGTCTTGATCCTGTCGTTGGTTCTTCTGGACTATCAAGGTATGTTGCCCGTTTGT‑3’；所述PCR反应液中还包括用于内标检测的上游引物、下游引物和探针，内标上游引物序列为5’‑GTGTCTGCGGCGTTTT ATCAT‑3’，内标下游引物序列为5’‑ACAAACGGGCAACATACCTTG‑3，内标探针序列为5’‑HEX‑TCATCCAGTGCAAGTCTTGATCCTGTC‑3’；所述试剂盒中还包括酶混合液，所述酶混合液中包含Taq酶和0.5～2U/μl的尿嘧啶DNA糖基化酶，同时在所述PCR反应液中还包含dUTP；所述试剂盒中还包括TB定量参考品、TB阳性对照和TB阴性对照。