[发明专利]从木本植物材料中提取叶绿体总RNA及同时提取总蛋白质的方法、叶绿体总蛋白质的应用

摘要

本发明公开了一种从木本植物材料中提取叶绿体总RNA的方法，先对植物材料进行粗提、纯化，再将得到的叶绿体材料加入交联聚乙烯吡咯烷酮，经过冻融处理、抽提、离心弃上清液，沉淀经洗涤、分离后得到叶绿体总RNA。本发明还公开了一种从木本植物材料中同时提取叶绿体总RNA和叶绿体总蛋白质的方法，先按照前述步骤得到叶绿体总RNA；然后向抽提液分层后保留的中间层和下层有机相中加入无水乙醇，孵育、离心后弃沉淀；再将上清液加入到含醋酸铵的甲醇溶液中，沉淀，洗涤，得到叶绿体总蛋白质。本发明的方法工艺效率高，产品纯度好，得到叶绿体总蛋白质可在二硫苏糖醇-聚丙烯凝胶电泳分析、蛋白质免疫印迹或双向电泳等分析中进行应用。

主权项

一种从木本植物材料中提取叶绿体总RNA的方法，包括以下步骤：（1）叶绿体纯化：按照常规方法从木本植物材料的叶片中进行粗提、纯化，得到叶绿体材料；（2）冻融处理：将上述纯化后的叶绿体材料加入交联聚乙烯吡咯烷酮，所述叶绿体材料与交联聚乙烯吡咯烷酮的质量比为1∶1～3，然后于‑20℃～‑80℃温度下进行冻融处理；（3）抽提总RNA：将经过冻融处理后的叶绿体材料加入冰浴预冷的Trizol试剂中，并加入冰浴预冷的氯仿，剧烈振荡后室温静置，再高速离心使抽提液分层，取分层后的上层水相加入冰浴预冷的异丙醇中，室温放置；再高速离心，弃去上清液，离心后的沉淀经洗涤、离心分离后，即得到所述木本植物材料的叶绿体总RNA。