[发明专利]样品中腐败乳酸菌的PCR 检测方法无效
| 申请号： | 201310017684.1 | 申请日： | 2013-01-17 |
| 公开（公告）号： | CN103088131A | 公开（公告）日： | 2013-05-08 |
| 发明（设计）人： | 李宪臻;李全;俞志敏;杨帆;王伟;蔡勇;郝庆山;高文举 | 申请（专利权）人： | 大连工业大学;四平金士百纯生啤酒股份有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/225;C12R1/46;C12R1/265;C12R1/01 |
| 代理公司： | 大连东方专利代理有限责任公司 21212 | 代理人： | 贾汉生;李馨 |
| 地址： | 116034 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种样品中腐败乳酸菌的PCR检测方法，该方法包括：腐败乳酸菌的超滤富集和液体培养增菌、煮沸-冻融法制备腐败乳酸菌的DNA模板、使用特异性引物通过聚合酶链式反应（PCR）对DNA模板进行扩增以及用琼脂糖凝胶电泳对PCR产物进行可视化等步骤。本发明可以检测出啤酒或清酒等测定样品是否受到腐败乳酸菌的污染，检测时间短、检测结果特异性强和结果判定简便。 | ||
| 搜索关键词： | 样品 腐败 乳酸菌 pcr 检测 方法 | ||
【主权项】：
一种样品中腐败乳酸菌的PCR检测方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：（1）在无菌条件下用0.22μm水系超滤膜过滤样品，将腐败乳酸菌富集在超滤膜上；（2）将富集腐败乳酸菌的超滤膜放入装有MRS液体培养基的离心管中，密封，于28~32℃培养12~20h进行增菌；（3）将增菌后的离心管在8000~10000r/min离心收集菌体，用无菌水洗菌体，离心，然后用无菌水配制成600nm吸光值为0.1~0.3的菌悬液，将菌悬液放入沸水浴中加热10~15min，然后放入冰浴中冷却10~15min，重复此加热和冷却步骤2~3遍，提取腐败乳酸菌DNA；（4）使用针对腐败乳酸菌的抗酒花基因HorA设计的特异性引物SEQ ID No.1和SEQ ID No.2，对腐败乳酸菌DNA中的抗酒花基因HorA进行PCR扩增；（5）在琼脂糖凝胶上对PCR产物进行电泳；（6）根据电泳结果分析样品中是否存在腐败乳酸菌。
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