[发明专利]一种低聚合度κ-卡拉胶寡糖的制备

摘要

一种低聚合度κ-卡拉胶寡糖的制备方法，包括κ-卡拉胶的酶解制备，并对降解产物进行分离纯化，得到较纯净的κ-卡拉寡糖混合组分。本发明特征为从海洋微生物Cellulophaga lytica strain：N5-2(NCBI，GENBANKD登录号为GU129978)中得到卡拉胶降解酶用于降解κ-卡拉胶得到低聚合度寡糖混合物。该酶为一种胞外酶，可作用于κ-卡拉胶的β-1，4糖苷键，作用位点分别为八糖和六糖，产物为二糖重复单位构成的低聚合度寡糖。本发明的制备方法成本较低，方法简便，相较于化学物理等方法，所得产物较单一，副产物少，便于大规模生产。

主权项

一种低聚合度κ‑卡拉胶寡糖制备，主要包括以下步骤：a：将活化的Cellulophaga lytica strain：N5‑2菌种涂于固体培养基上，挑取单菌落接入种子培养基中，25‑35℃，100‑200rpm/min摇床培养12‑24h；b：按1‑5％的接种量将种子液接种到发酵液中，25‑35℃，100‑200rpm/min摇床培养12‑24h；c：将发酵液在4℃条件下，3000‑6000rpm/min，离心30min，取上清液即为粗酶液；d：将1‑5％酶液与0.1‑2％κ‑卡拉胶底物1∶1混合，于25‑40℃、150r/min降解24‑72h，煮沸10min，终止酶作用；e：经使用等体积的乙醇与酶解液混合沉淀除酶蛋白，用分子量为500的透析袋以透析的方法去除盐类等小分子杂质，置于4℃以蒸馏水作为透析外液，每8h更换一次透析外液，直至透析外液经AgNO3溶液检测不到白色沉淀，经冷冻干燥得相对纯净的κ‑卡拉胶寡糖。