[发明专利]一种利用固定化拟无枝酸菌转化阿魏酸生产香草醛的方法

摘要

一种利用固定化拟无枝酸菌转化阿魏酸生产香草醛的方法，属于生物工程技术领域。本发明以木屑、甘蔗渣等纤维素材料为载体，以吸附方式固定拟无枝酸菌细胞。固定化细胞能重复利用10次，转化阿魏酸为香草醛的摩尔转化率保持在50%以上。在转化体系中耦联吸附树脂，香草醛产量达到19.65g/L，生产强度0.131g/L·h。本发明转化反应条件温和，对环境污染小，生产周期短，成本低，转化产物易分离纯化，具有良好的应用前景。

主权项

一种利用固定化拟无枝酸菌转化阿魏酸生产香草醛的方法，其步骤包括：（1）种子培养：将拟无枝酸菌（Amycolatopsis sp.）zhp06，即CCTCC NO：M 2011265，斜面菌种接种到种子培养基中，放置到28‑45℃，100‑300 r/min的恒温摇床中培养10~36 h；（2）菌体准备：将步骤（1）所得种子接种到菌体扩大培养基中，放置到28‑45℃，100‑300 r/min的恒温摇床中培养10~36 h；所述种子培养基和种子扩大培养基配方为：葡萄糖1～10 g，酵母膏5～20 g，Na2HPO4 ·12H2O 1～10 g，KH2PO4 0.1～2 g，NaCl 0.05～0.5 g，MgSO4·7H2O 0.05～0.5 g，CaCl2·2H2O 0.05～0.1 g；用自来水定容到1 L，调pH至7.2～7.4，121℃灭菌20 min；接种量为1%‑10%；（3）固定化细胞制备：将用清水洗净的木屑或甘蔗渣纤维质材料粉碎成粒径为20目到120目，清水清洗干净后灭菌，用量为60‑300 g/L加入到培养好菌体的步骤（2）所得培养液中，常温搅拌吸附1‑24 h，过滤得到固定化细胞；（4）转化阿魏酸为香草醛：以步骤（3）中得到的固定化细胞为催化剂，加入底物阿魏酸溶液，在35‑40℃下进行转化反应；底物阿魏酸溶液组成：K2HPO3 3～6 g/L，KH2PO3 0.1～1 g/L，底物阿魏酸5‑50 g/L，初始pH为7.0‑9.0，在摇瓶或发酵罐中进行反应；摇瓶转化：装液量30‑100 mL/ 250‑500 mL三角瓶，转速100‑300 r/min，转化10‑48 h；或发酵罐中转化：在发酵罐中反应，发酵罐通气量100‑400 L/h，转速100‑300 r/min，连续转化140‑200 h。