[发明专利]一种柑橘全爪螨若螨的RNA干扰方法

摘要

本发明公开了一种柑橘全爪螨若螨的RNA干扰方法，按照如下步骤完成：(1)柑橘全爪螨若螨的饲养；(2)对柑橘全爪螨若螨进行dsRNA溶液处理；(3)测定处理后柑橘全爪螨若螨蜕皮及存活情况，对RNA干扰效果进行评价。该方法设计新颖、合理，建立的RNA干扰导致柑橘全爪螨无法完成正常蜕皮而死亡，从而达到防治柑橘全爪螨的目的，有利于减少化学农药使用量，因而具有极其广阔的应用前景。

主权项

一种柑橘全爪螨若螨的RNA干扰方法，其特征在于：按照如下步骤完成：(1)、柑橘全爪螨若螨的饲养在培养皿内制成梯级滤纸隔离台，取洗净的柑橘叶片，将叶面向下置于滤纸隔离台上，用湿脱脂棉条压住叶沿，在叶片上接种橘全爪螨雌成螨，产卵24h后去除雌成螨，所雌成螨产的卵置于恒温光照培养箱中，控制温度为25±1℃，相对湿度为70％‑80％，光周期为L∶D=(14∶10)h连续培养5‑7天，得到柑橘全爪螨若螨。(2)、对柑橘全爪螨若螨进行dsRNA溶液处理将孵化的若螨挑在新的叶片上，在处理好的叶片上滴一滴dsRNA溶液，用0号毛笔将幼螨逐个轻轻挑于液滴上，浸5s后挑出，将浸过液的若螨置于恒温光照培养箱中控制温度为25±1℃，相对湿度为70％‑80％，光周期L∶D=(14∶10)h培养24h。所用dsRNA溶液为shRNA1溶液，其中shRNA1的碱基序列为：shRNA1：5′‑GATCGTCTGTTATTTCACC‑3′    SEQ NO 1shRNA1溶液浓度为2.0‑6.0μg/ml；(3)、测定处理后柑橘全爪螨若螨蜕皮及存活情况记录喂食dsRNA溶液后的柑橘全爪螨若螨的蜕皮及存活情况，评价RNA干扰效果。