[发明专利]异养小球藻的半连续发酵方法

摘要

本发明公开了一种异养小球藻的半连续发酵方法，按以下步骤进行：a.向一级发酵罐压入培养基并接种异养小球藻；重复培养－补充培养基的操作直到补加到一级发酵罐容积的80%；b.发酵液干重再次达到50g/L后，向二级发酵罐压入50～70%的发酵液；c.向一级发酵罐和二级发酵罐压入灭过菌的培养基，任一发酵罐发酵液干重达50g/L后，再向该发酵罐补充培养基，直至发酵液体积达该发酵罐容积的80%；d.将二级发酵罐内的发酵液压入三级发酵罐，重复培养－补充培养基的操作，发酵完成后压到后续处理；本方法满足了比较大的培养基/种子比例要求。减少了细胞生长的不适应性，使细胞生长更快，减少了停滞期，适于进行半连续发酵生产。

主权项

异养小球藻的半连续发酵方法，方法的特征是按以下步骤进行：a.一级发酵罐（1）空消、降温后，培养基罐（8）向一级发酵罐（1）压入灭过菌的培养基，然后接种异养小球藻；接种后一级发酵罐内发酵液体积为一级发酵罐（1）容积的30～50%；经过培养，发酵液干重达到50g/L后，培养基罐（8）继续向一级发酵罐（1）补充灭过菌的培养基，补充培养基的比例占发酵罐内发酵液体积的10～30%；经过培养，发酵液干重再次达到50g/L后，继续向一级发酵罐（1）按其内发酵液体积的10～30%补充灭过菌的培养基，直到补加到一级发酵罐（1）容积的80%；b.经过培养，发酵液干重再次达到50g/L后，一级发酵罐（1）向空消并降温后的二级发酵罐（2）压入发酵液，压入发酵液的比例占一级发酵罐（1）发酵液体积的50～70%；c.压料后，培养基罐（8）向一级发酵罐（1）和二级发酵罐（2）分批压入灭过菌的培养基，每次补充培养基的比例占各发酵罐内发酵液体积的10～30%；经过培养，任一发酵罐内发酵液干重达到50g/L后，再通过培养基罐（8）向该发酵罐按其内发酵液体积的10～30%补充灭过菌的培养基，直至发酵液体积达到该发酵罐容积的80%；d.经过培养，二级发酵罐（2）内的发酵液干重达到50g/L后，将二级发酵罐（2）内的发酵液压入三级发酵罐（3），压入发酵液占二级发酵罐（2）发酵液体积的50～70%，之后，一级发酵罐（1）向二级发酵罐（2）压入占一级发酵罐体积50～70%的发酵液；然后培养基罐向一级发酵罐（1）、二级发酵罐（2）、三级发酵罐（3）分批压入灭过菌的培养基，培养基罐每次向任一发酵罐补充培养基的比例分别占该发酵罐内发酵液体积的10～30%，经过培养，任一发酵罐内发酵液干重达到50g/L后，再向该发酵罐按其内发酵液体积的10～30%补充灭过菌的培养基，直至发酵液体积达到该发酵罐容积的80%；三级发酵罐（3）中的发酵液体积达到该发酵罐容积的80%，且三级发酵罐（3）内发酵液干重再次达到50g/L后，直接压到后续处理；除任一发酵罐刚接种时、任一级发酵罐刚接收上一级发酵罐压过来的发酵液时两种情形外，上述发酵过程中向任一发酵罐内补充培养基时要保证每次补充培养基后发酵液中的干物质含量高于30g/L；上述发酵过程中，任一级发酵罐向下一级发酵罐压入发酵液后，如果下一级发酵罐内发酵液体积不足该发酵罐容积的30%，应当立即补加培养基，使该级发酵罐内发酵液体积一次性补加到发酵罐容积的30%；上述一次性补充培养基时，补充培养基的体积不受发酵罐内发酵液体积的10～30%的限制；在各级发酵罐培养过程中，必要时分别通过碳源罐（5）、氮源罐（6）、碱液罐（4）、泡敌罐（7）通过连接管路向各级发酵罐注入碳源、氮源、碱液、泡敌，补加的方法是：通过取样分析，当碳源低于20g/L时就补加碳源达到40g/L，同时按照碳源∶氮源=10∶1的比例补加氮源；当任一发酵罐内有泡沫时则对该发酵罐补加泡敌，一次补加泡敌的量为该发酵罐发酵液体积的5‰；当PH低于7时则向发酵液里补加碱液；各级发酵罐的发酵温度为36度。