[发明专利]一种海洋地衣芽孢杆菌抗肿瘤蛋白的制备方法及其应用无效
| 申请号： | 201310034692.7 | 申请日： | 2013-01-30 |
| 公开（公告）号： | CN103966287A | 公开（公告）日： | 2014-08-06 |
| 发明（设计）人： | 张付云;徐凤;杨阳;苍桂璐;王维才 | 申请（专利权）人： | 大连海洋大学;张付云 |
| 主分类号： | C12P21/00 | 分类号： | C12P21/00;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30;A61K38/16;A61P35/00;A61P35/02;C12R1/10 |
| 代理公司： | 大连非凡专利事务所 21220 | 代理人： | 曲宝威 |
| 地址： | 116000 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | 一种海洋地衣芽孢杆菌抗肿瘤蛋白的制备方法，取干净、新鲜的海带并灭菌处理；对海带进行研磨，将研磨液均匀涂布于牛肉膏蛋白胨平板培养基上，在37℃的条件下恒温培养5~7天；挑取单菌落反复划线培养至纯菌株，得到海带内生地衣芽孢杆菌DNN6；以抑菌活性为指标优化菌株培养条件，优化的培养条件为菌株DNN6在pH9，蔗糖50g/L和蛋白胨10g/L的培养基中25℃发酵6天。8000r/min离心去除菌体，在上清液中加入硫酸铵，硫酸铵的饱和终浓度为95%，4℃静置过夜，过滤将沉淀用蒸馏水溶解后，用截留分子量为3600道尔顿的透析袋透析4天，取透析袋中物冷冻干燥，得海洋地衣芽孢杆菌抗肿瘤蛋白。本方法操作简单、成本低廉。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 海洋 地衣 芽孢 杆菌 肿瘤 蛋白 制备 方法 及其 应用 | ||
【主权项】：
一种海洋地衣芽孢杆菌抗肿瘤蛋白的制备方法，其特征在于：步骤如下：a、取干净、新鲜的海带并灭菌处理，所述的灭菌处理是用75%的酒精和1%的氯化汞对海带的表面进行灭菌处理；灭菌处理后对海带进行研磨，将研磨液均匀涂布于牛肉膏蛋白胨平板培养基上，在37℃的条件下恒温培养5~7天；b、挑取单菌落反复划线培养至纯菌株，得到地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis，该菌株已于2012年12月31日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC）,保藏号为CGMCC No. 7077；c、以抑菌活性为指标优化菌株培养条件，优化的培养条件为菌株DNN6在pH 9，蔗糖50 g/L和蛋白胨10 g/L的培养基中25℃发酵6天；d、8000 r/min离心去除菌体，在上清液中加入硫酸铵，硫酸铵的饱和终浓度为95%，4℃静置过夜，过滤将沉淀用蒸馏水溶解后，再用截留分子量为3600道尔顿的透析袋透析4天，取透析袋中物冷冻干燥，得到海洋地衣芽孢杆菌抗肿瘤蛋白。
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