[发明专利]一种铁皮石斛试管开花及结实的方法

摘要

本发明公开了一种铁皮石斛试管开花及结实的方法，该方法包括以下步骤：采用铁皮石斛茎段或蒴果作为外植体进行诱导培养，再经原球茎增殖培养、原球茎生根培养、生根苗诱导开花培养及授粉过程及结实培养后，形成试管花及试管果实；该方法可以准确有效地调控铁皮石斛试管开花率；并且，本发明采用在无菌环境中授粉及授粉后采用专用培养基进行结实培养，提高其结实率；所结果实的果夹直径可达0.8～1cm，授粉结实率高达90%。

主权项

一种铁皮石斛试管开花及结实的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）原球茎诱导培养选取健壮的生长良好的铁皮石斛茎段或蒴果作为外植体，将外植体消毒后，接种于下列无菌诱导培养基中：MS+BA1.5~2.0mg/L +NAA0.2~0.6 mg/L+白糖30~50g/L+琼脂粉5.5~8g/L+土豆汁60~70 ml/L+活性炭粉0.3~0.7g/L，在温度为23~25℃、光照强度为1500~2500lx、光照时间为9~11小时/天的条件下，培养45~60天，形成原球茎；（2）原球茎增殖培养将生长良好的原球茎转接入下列增殖培养基中：MS+白糖30~50g/L+琼脂粉5.5~8g/L+6‑BA0.5~0.8mg/L+NAA0.1~0.8mg/L+土豆汁30~50ml/L+红薯汁30~80ml/L+活性炭粉0.2~0.9g/L，进行增殖培养，培养的环境条件为：温度25~27℃，光照强度1800~3000lx，光照时间10~12小时/天，培养周期45~60天；（3）原球茎生根培养将原球茎转入下列生根培养基中：MS+白糖20~50g/L+琼脂粉5.5~10g/L+NAA 0.4~0.9mg/L+IAA 0.2~0.7mg/L+土豆汁20~50ml/L+红薯汁60~80ml/L+活性炭粉0.5 ~1.0g/L，在温度为23~27℃、湿度为40~60%、光照强度为2000~3000lx、光照时间为11~13小时/天的条件下，培养70~100天，得到生根苗；（4）生根苗诱导开花培养将生根苗接种于下列诱导开花培养基中：MS+白糖30~60g/L+琼脂粉5.5~11g/L+土豆汁30~50g/L+BA0.2~0.6mg/L+NAA0.1~0.9mg/L+PPP333 0.3~0.8mg/L+Spm1.0~6.0mmol/L+ZT1.5~6mg/L，进行诱导开花培养，培养的环境条件为：温度22~25℃，湿度30~50%，光照强度2300~2600lx，光照时间11~13小时/天，培养周期60~85天；（5）授粉过程及结实培养在经诱导开花培养基培养后的植株中，选取具有完整花结构的健壮植株，在无菌环境中进行人工授粉，再将授粉后的植株转接到下列授粉后培养基中：改良MS+白糖25~40g/L+琼脂粉5.5~10g/L+NAA 0.2~0.5mg/L+土豆汁30~50ml/L+红薯汁30~50ml/L+活性炭粉0.5~0.8g/L，在温度为22~25℃，湿度为40~60%，光照强度为2500~3200lx，光照时间为12~14小时/天的条件下，培养65~110天，得到铁皮石斛蒴果；其中，改良MS培养基中 KNO3、KH2PO4和H3BO3用量为MS培养基中KNO3、KH2PO4和H3BO3用量的三倍，其余组分含量不变。