[发明专利]一种快速检测食品中致病菌的方法

摘要

本发明涉及食品安全领域，一种基于非标记的氨基化纳米磁珠捕获痕量基因组脱氧核糖核酸（DNA）结合聚合酶链式反应（PCR）快速检测食品中致病菌的方法。现有技术的缺点是：国标培养方法需要增菌，检测时间长；免疫检测方法需要高质量的抗体，且一种抗体只对应一种致病菌；单纯的PCR检测技术也需要前增菌，检测时间长。本发明方法为：制备适合于加入PCR体系中的氨基磁珠，捕获经过简单处理的食品样品中的DNA，最终结合物直接进行PCR检测。本发明的优点是：检测快速；价格低廉；灵敏度高；可针对不同致病菌检测，且可同时检测多种致病菌；可做半定量检测或定量检测。

主权项

一种快速检测食品中致病菌的方法，包括以下步骤：(1)氨基磁珠的制备a)制备Fe3O4磁性纳米粒子；b)硅包被Fe3O4磁性纳米粒子；c)去除未被硅包被的裸露Fe3O4磁性纳米粒子，得硅包磁珠；d)氨基化硅包磁珠，得氨基磁珠；(2)待检样品制备将预处理后的待检食品样品离心，收集沉淀，将沉淀复溶于缓冲溶液中，加入表面活性剂、蛋白酶和溶菌酶孵育，后用沸水浴并用酚氯仿抽提得待检样品；(3)将氨基磁珠与待检样品混合，恒温振荡，磁性分离后洗涤，得吸附有致病菌基因组DNA的氨基磁珠；(4)将吸附有致病菌基因组DNA的氨基磁珠加入PCR体系中进行PCR检测。