[发明专利]一种博来霉素族衍生物的微生物发酵制备方法

摘要

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种博来霉素族衍生物的微生物发酵制备方法，该方法是通过培养SB9026(保藏号CCTCC M2011292)发酵用菌株、选择合适的种子培养基和发酵培养基和培养条件，在此基础上，在发酵罐中对上述微生物发酵制备方法进行中试放大，通过对温度、转速、pH值控制及原料补充控制等调控手段来调试和建立放大规模的新型活性博莱霉素衍生物6’-脱羟基-BLM S的微生物发酵制备工艺。该制备方法缩短6’-脱羟基-BLM S的发酵制备周期，提高6’-脱羟基-BLM S的发酵产率,同时增加了6’-脱羟基-BLM S在总代谢产物中的比例，便于后继的分离提纯。本发明的博来霉素族衍生物其化学结构通式如说明书中所示。

主权项

一种博来霉素族衍生物的微生物发酵制备方法，所述博来霉素族衍生物为6’‑脱羟基‑BLM S，其特征是，具体步骤为：1）黄绿链霉菌SB9026的发酵培养：将黄绿链霉菌SB9026菌株接种至种子培养基中培养，在25°C‑35℃下培养1‑3天；再取所述种子培养基转接到发酵培养基中培养，接种量为8%‑12%，在25°C‑35℃下培养9‑10天；所述种子培养基为：12g/L‑17g/L甘油、12g/L‑17g/L棉籽粉、2.5g/L‑3.5g/L NaCl和4.5g/L‑5.5g/L蛋白胨，其余为水，pH值为6.8‑7.2；所述发酵培养基为：18g/L‑22g/L葡萄糖，12g/L‑17g/L可溶性淀粉，18g/L‑22g/L黄豆粉，4.5g/L‑5.5g/L酵母粉，0.08g/L‑0.12g/L CuSO₄·5H₂O，0.48g/L‑0.52g/L ZnSO₄·7H₂O和2.5g/L‑3.5g/L CaCO₃，其余为水，pH为6.8‑7.2；其中黄绿链霉菌SB9026的保藏号为CCTCC M 2011292；2)发酵罐发酵制备博来霉素族衍生物：采取逐级放大的方式将所述发酵培养基转接至发酵罐中发酵培养；所述发酵罐培养时采取梯度降温模式，初始温度为32°C，当发酵罐培养至20‑26小时降温至30℃；当发酵罐培养至55‑65小时时降温至28°C，继续发酵培养115‑125小时；在发酵培养过程中对微生物的生长和次代谢产物的合成进行控制，同时通过在线监测pH值和溶氧值，使发酵液中残糖浓度维持在0.8g/L‑1.2g/L，同时pH值维持在7.5以下，溶氧维持在40%‑60%，发酵周期为6‑12天；6’‑脱羟基‑BLM S在发酵液中的产量达30mg/L以上。