[发明专利]一种运用圆二光谱检测L-半胱氨酸浓度的方法

摘要

一种运用圆二光谱检测L-半胱氨酸浓度的方法，属于分析化学技术领域。本发明通过将L-半胱氨酸与试剂按一定的体积比混合，使之发生自组装形成金纳米粒子二聚体，再将反应物置于圆二光谱分析仪下，检测主波长525nm处信号强度，从而测算出L-半胱氨酸的浓度大小。与传统的仪器方法相比，本发明在液体的环境下利用AuNPs和L-半胱氨酸反应形成金纳米粒子二聚体，二元组装体的形成可以放大L-半胱氨酸的手性，金纳米粒子二聚体在可见光区产生CD信号。通过圆二光谱测定液体环境中的CD信号强度来测定L-半胱氨酸含量。本发明只在液体环境中反应，不需要清洗的步骤，只需要一步反应，简化了反应的条件，提高了检测的灵敏度。

主权项

一种运用圆二光谱检测L‑半胱氨酸浓度的方法，其特征在于用合成的金纳米粒子与待检测目标物L‑半胱氨酸反应，L‑半胱氨酸通过Au‑S键修饰于金纳米粒子表面，利用L‑半胱氨酸的静电相互作用在液体的环境下金纳米粒子与L‑半胱氨酸反应形成金纳米粒子二聚体，金纳米粒子二聚体的形成导致等离子手性的产生，金纳米粒子二聚体在可见光区产生圆二光谱CD信号，通过圆二光谱测定液体环境中的CD信号强度来测定L‑半胱氨酸含量；工艺步骤为：（1）25nm金纳米粒子的合成25nm金纳米粒子用柠檬酸三纳还原法合成：洁净的三口烧瓶中加入47.5mL超纯水，加入0.8mL质量浓度 0.4%氯金酸溶液，搅拌并加热至沸腾，7‑8min后加入1mL 质量浓度1%柠檬酸三钠溶液，溶液从无色变为红色后，停止加热，继续搅拌30min；（2）金纳米粒子组装取1000μL步骤 （1） 制备出来的25nm金纳米粒子，8000 rpm离心10min，重悬至相同体积的0.01 M的pH6.0磷酸盐缓冲液中，加入100μL 50nM L‑半胱氨酸溶液反应30 min，组装形成金纳米粒子二聚体；（3）金纳米粒子二聚体结构的表征步骤（1）制备的25 nm金纳米粒子与步骤（2）制备的金纳米粒子二聚体各取10μL滴于铜网上进行电镜表征；步骤（1）制备的25 nm金纳米粒子与步骤（2）制备的金纳米粒子二聚体各取1000μL进行动态光散射表征；（4）圆二光谱检测，绘制CD信号强度～L‑半胱氨酸浓度标准曲线取1000μL步骤 （1） 制备出来的25nm金纳米粒子，8000 rpm离心10 min，重悬至相同体积的0.01M的pH6.0磷酸盐缓冲液中；在该相同体系中分别加入100μL不同浓度0nM、0.05nM、0.1nM、0.2nM、0.5nM、1nM、2nM、5nM的L‑半胱氨酸标准品溶液反应30 min，加入到微量比色皿中，测CD信号，绘制525nm处CD信号强度与L‑半胱氨酸浓度标准曲线。