[发明专利]一种单核苷酸多态性熔解曲线分析方法

摘要

本发明涉及一种单核苷酸多态性熔解曲线分析方法。本发明的方法基于等位基因特异性扩增法，针对已知SNP检测位点，设计两条特异性引物，其中一条特异性引物设计时加入一段无关序列，从而增加两种不同PCR产物的Tm值的区分度，在一个体系中检测已知SNP突变，明确区分野生型，杂合型和突变型，为临床检测提供一种结果稳定，重复性好，适用机型更广的SNP分析方法。

主权项

一种基于等位基因特异性扩增的SNP检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)以待测基因为模板，以针对SNP位点的特异性引物以及与特异性引物配对的公用引物为引物对，以Taq DNA聚合酶进行PCR扩增；其中，所述的针对SNP位点的特异性引物包括针对野生型等位基因位点的引物1；针对突变型等位基因位点的引物2，所述引物1和引物2具有如下序列：A‑B‑C；其中，A为与模板匹配的序列片段，B为针对SNP位点的碱基；B在引物1和引物2中不同，在一条引物中B与野生型SNP位点碱基匹配，在另一引物中B与突变型SNP位点碱基匹配；C为无或为1‑2个碱基的与模板匹配的序列片段；且，引物1或引物2中一条引物的5’端还包括5‑20个碱基的与野生型及突变型模板均不匹配的无关序列，使得引物1与引物2对应的特异性PCR产物Tm值差异大于2℃；所述的公用引物是远离SNP位点的引物，其与引物1或引物2构成引物对；(2)分析PCR扩增产物，确定待测样品中待测基因的SNP类型。