[发明专利]尿液中(S)-NNAL和(R)-NNAL的气相色谱-质谱-质谱联用检测方法

摘要

尿液中(S)-NNAL和(R)-NNAL的气相色谱-质谱-质谱联用检测方法，包括：向尿液样品加入rac-NNAL-甲基-d3溶液、磷酸二氢氨缓冲溶液（pH6.4,0.6M）和β-葡糖苷酸酶混匀后置入微波辅助萃取仪中在37℃恒温酶解,再将酶解后的尿样经过MIP-NNAL固相萃取小柱净化，减压浓缩至干，加入三乙基胺无水乙腈溶液、(S)-(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酰氯的无水乙腈溶液，衍生化后再对样品进行GC-MS-MS分析，进而换算出尿样中(S)-NNAL和(R)-NNAL的含量。本发明提供了一种检测限低、稳定性好、前处理简单、快速准确的尿样中(S)-NNAL和(R)-NNAL的分析检测方法，填补了这一技术领域的空白。

主权项

尿液中(S)‑NNAL和(R)‑NNAL的气相色谱‑质谱‑质谱联用检测方法，其特征在于该方法包括以下步骤：①用测定旋光并比对的方法确定(S)‑NNAL和(R)‑NNAL的构型并作为参照，或用Mosher方法确定(S)‑NNAL‑(S)‑(+)‑α‑甲氧基‑α‑三氟甲基苯乙酸酯和(R)‑NNAL‑甲基‑d3‑(S)‑(+)‑α‑甲氧基‑α‑三氟甲基苯乙酸酯的构型并作为参照；②配制含有rac‑NNAL和氘代rac‑NNAL‑甲基‑d3的混合标准溶液，再用(S)‑(+)‑α‑甲氧基‑α‑三氟甲基苯乙酰氯的无水乙腈溶液和三乙基胺的无水乙腈溶液衍生化，然后对衍生化以后的混合标准溶液进行GC‑MS‑MS分析;用确定构型后的(S)‑NNAL‑(S)‑(+)‑α‑甲氧基‑α‑三氟甲基苯乙酸酯和(R)‑NNAL‑(S)‑(+)‑α‑甲氧基‑α‑三氟甲基苯乙酸酯通过保留时间确定相应的色谱峰保留时间，并建立(S)‑NNAL‑(S)‑(+)‑α‑甲氧基‑α‑三氟甲基苯乙酸酯的标准溶液工作曲线和(R)‑NNAL‑(S)‑(+)‑α‑甲氧基‑α‑三氟甲基苯乙酸酯的标准溶液工作曲线；③将在室温下解冻后的尿液样品摇匀，加入rac‑NNAL‑甲基‑d3溶液、磷酸二氢氨缓冲溶液（pH6.4,0.6M）和β‑葡糖苷酸酶，充分混匀后置入微波辅助萃取仪中在37℃恒温酶解,再将酶解后的尿样上样到MIP‑NNAL固相萃取小柱净化，淋洗后用二氯甲烷洗脱，加入无水硫酸钠干燥后过滤，减压浓缩至干，加入三乙基胺无水乙腈溶液、(S)‑(+)‑α‑甲氧基‑α‑三氟甲基苯乙酰氯的无水乙腈溶液，盖紧，衍生化后立即对样品进行GC‑MS‑MS分析。