[发明专利]一种以废弃泡沫为载体的固定化细胞催化剂的制备方法及其应用

摘要

本发明公开了一种以废弃聚氨酯泡沫为载体的固定化细胞催化剂的制备方法及其应用，该方法包括：用米根霉发酵培养基培养米根霉、泡沫载体的预处理和细胞的培养与固定化步骤。应用为制备的固定化细胞催化剂在制备生物柴油中的应用。本发明利用废弃泡沫对米根霉细胞进行固定，制成全细胞催化剂，不仅可以回收利用废弃聚氨酯泡沫，且细胞固定方法简单，成本低廉。利用制备的固定化细胞催化剂催化大豆油、麻疯树籽油和橡胶籽油等植物油脂以及废弃油脂的甲酯化得率达到90%以上，具有较好的重复使用性能，减少了脂肪酶的分离、提取、纯化过程，在工艺上降低了生物柴油的生产成本，能实现生物柴油的高效、清洁和经济性制备生产。

主权项

一种以废弃泡沫为载体的固定化细胞催化剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）采用米根霉发酵培养基，灭菌后接种来自于斜面培养的米根霉孢子，于25‑34 ℃、180 rpm摇床培养48‑72h，作为种子液备用；其中，米根霉发酵培养基配方为：1‑2%胰蛋白胨、1‑3%大豆油、 0.1%NaNO3、0.1%KH2PO4、0.05%MgSO4，初始pH为5.5；（2）泡沫载体的预处理将废弃聚氨酯泡沫裁剪成边长为5‑15mm的立方体，用蒸馏水浸泡漂洗数次，121℃下高温灭菌20‑30min，再更换蒸馏水重复灭菌两次，取出后干燥备用；（3）细胞的培养与固定化取250mL三角瓶加入80mL米根霉发酵培养基和0.5～1.0g预处理后的废弃泡沫，灭菌后接种0.5mL由步骤（1）得到的米根霉种子液，置于180rmp、28℃摇床中培养48‑72h；培养过程中细胞吸附在泡沫孔隙内生长，培养及固定化结束后，取出用清水漂洗数次，室温干燥，即可。