[发明专利]一种用于室内培养繁殖葡萄霜霉病菌的方法

摘要

本发明提供了一种用于室内培养繁殖葡萄霜霉病菌的方法，所述方法包括如下步骤：（1）采集葡萄霜霉病菌菌样；（2）孢子囊悬浮液的制备；（3）葡萄品种及叶片的选择；（4）孢子囊悬浮液的接种；（5）叶片保湿培养。该方法简单易学，容易操作，对试验仪器要求不高，叶片发病后仍可以在相同环境条件下培养7-10天，且克服了以往葡萄霜霉病接种后难于成活、在室内不能对菌样进行大量繁殖、得不到充足孢子囊悬浮液的缺陷，可用于葡萄霜霉病的监测、致病性测定、药剂筛选等大型试验，具有较高的实际应用价值。

主权项

一种用于室内培养繁殖葡萄霜霉病菌的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：（1）采集葡萄霜霉病菌菌样：在不同地区的葡萄种植区采集葡萄霜霉病菌的病叶，低温0℃‑10℃保存带回室内；（2）孢子囊悬浮液的制备：（A1）将病叶表面杂质和葡萄霜霉病菌表面老熟的孢子囊冲洗掉，在18℃‑20℃下黑暗培养24h‑32h诱导产生新生的孢子囊；（A2）将新生孢子囊冲下制成孢子囊含量为1×105个‑1.5×105个/mL的孢子囊悬浮液；（A3）将新生孢子囊悬浮液于4℃预冷20min‑30min，室温放置待悬浮液温度为室温时用于接种；（3）葡萄品种及叶片的选择：葡萄品种采用易感霜霉病品种；叶片选择所述易感品种植株叶龄一致、枝条顶端第一至第三片完全展开的健康叶片；同时，所述葡萄植株及叶片生长期均未用过药且无霜霉病发生；（4）孢子囊悬浮液的接种：将孢子囊悬浮液用喷雾法离体接种（3）中所述健康葡萄叶片；（5）叶片保湿培养：（A1）在培养皿中铺有两层无菌水浸湿的滤纸上放置玻璃棒，待叶片接种后立即将接种后的叶片正面朝下放在玻璃棒上，叶片不与滤纸直接接触，叶柄用脱脂棉保湿，将培养皿密封；（A2）将上述装有叶片的培养皿置于18℃‑20℃下黑暗、RH100%条件下培养24h‑32h后进行光照培养12h，再进行黑暗培养12h，按此顺序以后每天18℃‑20℃下进行12小时光照/黑暗交替培养至霜霉病菌侵染叶片发病产生大量孢子囊，此期间保证湿度RH100%。