[发明专利]用于分离纯化羊泰勒虫裂殖子的免疫亲和层析柱及其制备方法

摘要

本发明公开了用于分离纯化羊泰勒虫裂殖子的免疫亲和层析柱及其制备方法，包括以下步骤：（1）抗体的纯化；（2）抗体的上样前处理；（3）抗体的偶联。应用本发明的免疫亲和层析柱，从镜检图中看出，视野中分散着纯化后的羊泰勒虫裂殖子，无其他杂质存在，且细胞形态完整独立，因此本发明对于羊泰勒虫裂殖子的纯化有较好的效果。

主权项

一种用于分离纯化羊泰勒虫裂殖子的免疫亲和层析柱的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）抗体的纯化：利用protein G层析柱纯化血清抗体：将填料与结合缓冲液按照1:1体积比例预混后缓慢装入层析柱中，待填料充分沉淀后按照流速1 ml/min加5 ml结合缓冲液来平衡，将染虫绵羊血清按照流速1 ml/min加入到制好的层析柱中，收集流出液；用30 ml结合缓冲液按照流速2 ml/min过柱，待完全清洗后，用10‑15 ml洗脱缓冲液按照流速1 ml/min过柱，收集流出液，SDS‑PAGE验证纯化效果；用平衡缓冲液平衡柱子，以备下次使用；所述结合缓冲液：20 mmol/L磷酸氢二钠，0.15 mol/L 氯化钠，pH 8.0；所述洗脱缓冲液A：0.1 mol/L 甘氨酸，pH 2.5；所述平衡缓冲液： 1 mol/L Tris‑HCl，pH 8.5；（2）抗体的上样前处理：用20 ml偶联缓冲液清洗脱盐柱，加入3 ml纯化的IgG过柱脱盐，收集流出液，将1/10流出液质量的氧化剂偏高碘酸钠固体粉末加入到样品中进行氧化处理，室温振荡1 h，立即再次进行脱盐处理；所述脱盐柱：聚丙酰胺凝胶介质；（3）抗体的偶联：吸取2 ml Affi‑Gel凝胶至15 ml管中，完全沉淀后移除上清液，加10 ml偶联缓冲液，混合均匀，待凝胶完全沉淀后，移除上清液，重复上述清洗过程；清洗完成后，再次加入5 ml偶联缓冲液，将其转移至偶联柱中；加抗体至偶联柱中，室温振荡偶联24 h，收集流出液检测偶联率；用1倍柱容量的PBS清洗偶联柱，将偶联完成的偶联柱放入4℃保存备用；所述偶联缓冲液：100 mmol/L 醋酸钠、100 mmol/L 氯化钠，pH 5.5。