[发明专利]一种噬菌核霉的固体发酵产孢方法

摘要

本发明属于微生物农药技术领域，具体主要涉及优化对菌核病具有强寄生、致腐能力的噬菌核霉的固体发酵产孢的研究。这里描述的噬菌核霉菌株，由我们筛选、诱变并保存。单胞分离后转移至马铃薯葡萄糖琼脂培养基试管斜面内培养后作母菌种，进而经修饰过的马铃薯葡萄糖培养基培养获得二级菌种，再经优化的固体发酵方法使其产生分生孢子。发酵所用的固体发酵基质为麸皮，通过优化发酵条件及营养液组成、配比后得到最优产孢条件，发酵所获得的孢子-基质混合物经干燥后可直接用于田间菌核病的防治。本发明方法可在短时间周期内产生大量的分生孢子，可用于预防植物的菌核病。

主权项

一种新的噬菌核霉的固体发酵产孢方法，其特征包括如下步骤：(1)噬菌核霉K1孢子悬浮液的制备：将噬菌核K1菌株置于马铃薯葡萄糖琼脂培养基斜面上，与20℃条件下培养6～8天，用无菌水冲洗斜面孢子，利用血球计数法调整分生孢子悬浮液浓度至106/ml，放入4℃冰箱内备用。(2)二级种子液的制备：取经修饰过的马铃薯葡萄糖培养基(在培养基中加入0.7‰琼脂)，以1～1.5％的接种量想发酵种子液培养基接种孢子悬浮，于摇床中振荡培养。培养条件：20℃，150r/min，培养6～8天，获得二级菌种。(3)获得产量高得固体发酵条件：以麸皮为基质，对固体发酵产孢条件进行优化。首先，确定最佳产孢天数为8～11天，添加微量元素营养液含量为70％～80％，经过Plackett‑Burman试验设计确定对孢子产量有影响的因子。之后，进行正交试验(如不同碳源、有机无机氮源)选出产孢最优组合。最后，进行Response Surface试验设计，确定添加最有影响因子的最佳含量。实验验证理论与实际的相符性，即得到最优产孢条件。其中：步骤(3)所添加的微量元素营养液为K2HPO4、EDTA、CaCl2.2H2O、MgCl2.6H2O、ZnSO4.7H2O、FeSO4.7H2O、Na2MoO4.2H2O、CoCl2.2H2O步骤(3)中Plackett‑Burman试验就是筛选试验设计，主要针对因子数较多，且未确定众因子相对于响应变量的显著性是，采用的试验设计方法。步骤(3)中Response Surface是指响应变量η与一组输入变量(ζ1，ζ2，ζ3...ζk)之间的函数关系式：η＝f(ζ1，ζ2，ζ3...ζk)。利用统计模型对产孢结果进行预测。