[发明专利]利用分子印迹电化学传感器检测微量赤霉素A3的方法

摘要

本发明公开了一种利用分子印迹电化学传感器检测微量赤霉素A3的方法。以邻苯二胺为功能单体，赤霉素为模板分子在金电极表面电聚合得到赤霉素A3分子印迹膜；在pH=7.4的过氧化氢-对苯二酚底液中，与三价铁离子络合的聚酰胺-胺树枝状大分子在通电的情况下能够催化降解过氧化氢；利用样品中的赤霉素A3竞争取代功能化的树枝状大分子标记的赤霉素A3导致对苯醌还原成对苯二酚的还原强度升高，建立一种用于检测赤霉素A3的方法。当赤霉素A3在3×10-7mol/L～6×10-9mol/L浓度范围内时，电化学信号升高程度与赤霉素A3的浓度呈良好的线性关系，方法检出限为2.0×10-9mol/L。本发明提高了检测的灵敏度和选择性，对于低浓度赤霉素A3的检测易于自动化。

主权项

1.一种利用分子印迹电化学传感器检测微量赤霉素A3的方法，其特征在于具体步骤如下：（1）金电极的处理：将金电极依次用1.0μm、0.3μm和0.05μm氧化铝粉进行表面抛光处理，然后依次在体积百分比浓度为50%的硝酸和无水乙醇中各浸泡洗涤5min，取出后在纯水中超声洗涤5min，然后在0.5mol/LH₂SO₄中于-0.2～1.0V进行电化学处理，直到获得稳定的循环伏安曲线；（2）赤霉素A3分子印迹电化学传感器的制备：将步骤（1）处理干净的金电极置于含1.0×10^-3～2.0×10^-3mol/L邻苯二胺、5×10^-4mol/LGA3的混合溶液中，在0V～0.8V间于50mV/s的扫描速率用循环伏安法扫描30圈；取出金电极并用二次蒸馏水冲洗干净后静置晾干；再将金电极放入体积比为8:1的无水甲醇-冰乙酸体系中，在搅拌下洗涤金电极表面的聚合膜3min，用蒸馏水冲洗干净后静置3～5min,然后把金电极浸入赤霉素A3的过饱和水溶液中10～30min，以便赤霉素A3分子能够掩蔽所有的在洗脱步骤中形成的分子印迹孔穴；然后在10^-3mol/L功能化树枝状大分子标记的赤霉素溶液中孵化5～30min，从而制成赤霉素A3分子印迹电化学传感器；（3）检测方法：在小烧杯中加入含1.0×10^-3mol/L过氧化氢、5.0×10^-3mol/L对苯二酚以及0.5mol/L氯化钾的0.05mol/L、pH=7.4的磷酸盐缓冲溶液10mL作为检测体系；将步骤（2）孵化完全的赤霉素A3分子印迹电化学传感器放入3×10^-7～6×10^-9mol/L浓度范围内的赤霉素A3标准溶液中进行竞争吸附，10～30min后接入检测体系，选用电化学工作站进行差分脉冲伏安法扫描，扫描电压-0.5～0.3V；（4）标准工作曲线的绘制：在15mL小烧杯中加入10mL含1.0×10^-3mol/L过氧化氢、5.0×10^-3mol/L对苯二酚以及0.5mol/L氯化钾的0.05mol/L、pH=7.4的磷酸盐缓冲溶液；将已在功能化树枝状大分子标记的赤霉素A3溶液中孵化完全的赤霉素A3分子印迹电化学传感器浸入10mL赤霉素A3标准溶液中竞争吸附，15min后接入检测体系进行差分脉冲伏安检测；赤霉素A3在3×10^-7mol/L～6×10^-9mol/L浓度范围内与还原峰电流值I呈良好的线性关系：I(10^-6A)=16.64+1.82C(10^-8mol/L)，线性相关系数r=0.9928；（5）待测样中赤霉素A3含量的测定：在15mL小烧杯中加入10mL含1.0×10^-3mol/L过氧化氢、5.0×10^-3mol/L对苯二酚以及0.5mol/L氯化钾的0.05mol/L、pH=7.4的磷酸盐缓冲溶液；将孵化完全的赤霉素A3分子印迹电化学传感器浸入10mL赤霉素A3待测样品溶液中竞争吸附，15min后接入检测体系进行差分脉冲伏安扫描，扫描电压-0.5～0.3V，得到峰电流值i；最后根据校正曲线计算出赤霉素A3的浓度C。