[发明专利]一种西洋参不定根组织培养方法

摘要

本发明公开了一种西洋参不定根组织培养方法，包括如下步骤：（1）西洋参愈伤组织的诱导；（2）西洋参愈伤组织的继代培养；（3）西洋参不定根的诱导；（4）西洋参不定根的继代培养；（5）西洋参不定根的反应器培养；本发明的方法，其生长速率要比原根快很多，培养一个培养周期后可增殖21.76倍，并且其活性次生代谢产物的产率高且比较稳定，培养物均一，同时又不受天灾等自然环境的影响。本发明具有工艺过程简单，成本低廉,诱导率高，重复性好，不定根增殖快等特点。

主权项

一种西洋参不定根组织培养方法，其特征是包括如下步骤：（1）西洋参愈伤组织的诱导：取灭菌后的西洋参新鲜根除去根皮的组织，切成0.5～1cm2的小块接种到第一种固体培养基上，在无菌、23～25℃及避光条件下培养3～4周，形成愈伤组织；（2）西洋参愈伤组织的继代培养：将愈伤组织接种到第二种固体培养基上，在无菌、23～25℃及避光条件下培养3～4周；（3）西洋参不定根的诱导：将步骤（2）获得的继代培养出的愈伤组织接种到第三种固体培养基上，在无菌、23～25℃及避光条件下培养3～5周，培养出西洋参不定根；（4）西洋参不定根的继代培养：挑选出生长良好的步骤（3）获得的西洋参不定根接种到液体培养基内，在摇床上，在无菌、23‑25℃及避光条件下培养4～5周，获得西洋参不定根；（5）西洋参不定根的反应器培养：将步骤（4）获得的西洋参不定根接种到含有2L液体培养基的3L球形鼓泡式反应器中，在无菌、20‑25℃及避光条件下培养4～5周，收获，干燥；所述第一种固体培养基为：含有1.0‑2.0mg/L(2,4‑二氯苯氧基)乙酸、0.1‑0.5mg/L激动素、30‑40g/L蔗糖的pH=5.8‑6.0的MS固体培养基；所述第二种固体培养基为：含有1.0‑2.0mg/L(2,4‑二氯苯氧基)乙酸、0.1‑0.5mg/L6‑苄基腺嘌呤、30‑40g/L蔗糖的pH=5.8‑6.0的MS固体培养基；所述第三种固体培养基为：含有1.0‑5.0mg/L吲哚丁酸、30‑40g/L蔗糖的pH=5.8‑6.0的MS固体培养基；所述液体培养基为含有3.0‑5.0mg/L吲哚丁酸、0.5‑1.0mg/L萘乙酸、30‑40g/L蔗糖的pH=5.8‑6.0的MS液体培养基。