[发明专利]一种纳豆芽孢杆菌的固体发酵生产方法

摘要

本发明涉及一种纳豆芽孢杆菌的固体发酵制备方法及其在养殖中的应用，采用纳豆芽孢杆菌作为发酵菌种，接种于经过优化的固体发酵培养基中，35~37℃培养，经过三级放大而进行大规模发酵生产。生产工艺简单稳定，活菌体密度高，发酵产物无需分离纯化可以直接干燥使用。将纳豆芽孢杆菌培养物作为饲料添加剂添加到猪饲料中，能够促进机体对饲料中营养成分的吸收，提高饲料的利用率，同时还能抑制肠道中有害微生物的生长，提高动物的免疫力和成活率，促进生长，降低料肉比。

主权项

一种纳豆芽孢杆菌培养物的制备方法包括以下步骤：  （1） 菌种活化：   本发明采用纳豆芽孢杆菌（Bacillus Subtilis natto）作为发酵菌种，菌种编号：1.1086，购于中国普通微生物菌种保藏管理中心，将‑80℃保存的纳豆芽孢杆菌菌种在种子培养基（胰化蛋白胨 10g，酵母提取物 5g，NaCl 10g，25%浓度MnSO4添加至0.2%，琼脂粉15g，加水至1升，高温高压灭菌备用）固体斜面上划线，37℃培养18~20小时；   （2）制备一级种子：   将活化的纳豆芽孢杆菌菌种，用接种环挑取一环接种于200 mL 液体种子培养基中（胰化蛋白胨 10g，酵母提取物 5g，NaCl 10g，25%浓度MnSO4添加至0.2%，加水至1升，高温高压灭菌备用），将三角瓶置于摇床中，37℃，250rpm，振荡培养16~18小时后，制得一级种子液；   （3）配制固体发酵培养基：固体干基：以玉米粉和豆饼粉为基础料（玉米粉与豆饼粉的质量之比为1:1），葡萄糖1.5%，NaCl 0.5%，KH2PO4 0.3%，MnSO4·H2O 0.04%；将固体干基加入质量比为1:1~2的无菌水，pH值为自然条件，搅拌均匀；将固体培养基经121℃、20min高温高压灭菌，待冷却后即可作为固体发酵培养基使用；   （4）固体发酵：将经过灭菌处理的固体发酵培养基按照8~10%的接种量接入一级种子菌，搅拌均匀，保持湿度为40~60%，温度为35~37℃培养16~18个小时，制得二级种子，将二级种子按照8~10%的接种量加入灭菌固体发酵培养基中进行扩大培养，搅拌均匀，保持湿度为40~60%，温度为35~37℃培养16~18个小时，制得三级种子；可以根据具体的培养用量，进一步将三级种子按照8~10%的接种量进一步扩大培养；将纳豆芽孢杆菌培养物进行菌落计数，活菌体浓度可达1.0×109 CFU/g 鲜曲，芽孢形成率在90%以上。