[发明专利]一株可高效表达外源分泌蛋白的枯草芽孢杆菌有效
| 申请号： | 201310100812.9 | 申请日： | 2013-03-26 |
| 公开（公告）号： | CN104073458B | 公开（公告）日： | 2018-10-12 |
| 发明（设计）人： | 范岩;陆亚敏;杜秀贞;杜华东;付奇;乔宾福 | 申请（专利权）人： | 南京百斯杰生物工程有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/75;C12R1/125 |
| 代理公司： | 南京天华专利代理有限责任公司 32218 | 代理人： | 夏平;傅婷婷 |
| 地址： | 211100 江苏省南京市*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一株可高效表达外源分泌蛋白酶的枯草芽孢杆菌。一个表达外源蛋白的枯草芽孢杆菌宿主菌，该表达外源蛋白的枯草芽孢杆菌宿主菌中两种外分泌蛋白酶‑‑‑枯草杆菌碱性蛋白酶的基因apr和枯草芽孢杆菌中性金属蛋白酶的基因npr以及产孢子基因spoIIAC被敲除。所得到的枯草芽孢杆菌宿主菌能够应用于基因工程手段高产外源蛋白。在此基础上，本发明成功构建了一株分泌普鲁兰酶的基因工程菌，能够高产普鲁兰酶，经过发酵工业研究在工业化生产中具有广阔的发展前景。 | ||
| 搜索关键词： | 一株可 高效 表达 分泌 蛋白酶 枯草 芽孢 杆菌 | ||
【主权项】：
1.一株高产普鲁兰酶基因工程菌株，其特征在于用普鲁兰酶基因表达框来代替表达外源蛋白的枯草芽孢杆菌宿主菌基因组原有α‑淀粉酶基因amyE表达框；其中，所述的表达外源蛋白的枯草芽孢杆菌宿主菌中两种外分泌蛋白酶‑‑‑枯草杆菌碱性蛋白酶的基因 aprE和枯草芽孢杆菌中性金属蛋白酶的基因nprE以及调控孢子形成的sigma‑F因子基因sigF被敲除；所述的普鲁兰酶基因表达框：（1）该表达框架具有来自于枯草芽孢杆菌（B.subtilis），地衣芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌（B.amyloliquefaciens）的三个串联重复天然启动子，序列如SEQ ID NO.5所示；（2） 该表达框架含有合成核糖体结合位点，序列如SEQ ID NO.6所示；（3）该表达框架普鲁兰酶基因来源于嗜酸普鲁兰芽胞杆菌(B.acidopulluticus)，序列如SEQ ID NO.1所示；（4）该表达框架含有合成的终止子，序列如SEQ ID NO.7所示；（5）该表达框架在普鲁兰酶编码基因的起始密码子上游插入了一个强自然信号，序列如SEQ ID NO.8所示。
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