[发明专利]一种菜用大豆鲜籽粒品质1H NMR评价方法

摘要

本发明涉及一种菜用大豆鲜籽粒品质1H NMR评价方法，属于果蔬品质分析领域。它首先对不同品种、不同品质的菜用大豆样品进行低温液氮粉碎、50％甲醇超声快速浸提，然后在相同的参数条件下对样品提取液进行核磁共振信号采集，对采集得到的图谱进行反转卷积，通过Chenomx数据库匹配与DSS内标定量，确定可溶性糖、游离氨基酸、有机酸等系列代谢物的组成及含量，从而明确不同菜用大豆品种的特征，并根据相应的核磁共振氢谱指纹图谱数据库，进行模式识别多变量分析，以获取有效的品质区分与评价结果。本发明方法具有全面、准确、可靠、高效等优点。

主权项

一种菜用大豆鲜籽粒品质1H NMR评价方法，其特征在于包括如下步骤：1)原料采集：采摘R6‑R7期菜用大豆鲜籽粒，快速置于‑80℃深冷冰箱低温冷冻2h～4h，经真空冷冻干燥24h～48h、低温液氮粉碎后，过0.25mm孔径筛处理作为供试原料。2)样本制备：a.准确称取200mg～500mg粉碎样品加入体积比50％的甲醇溶液1000μL，进行冰水浴超声提取3s～5s，间歇4s，循环3次；b.浸提液经4℃、13000rpm高速离心10min～１5min后，取上清液用氮气吹干，然后置于‑80℃深冷冰箱冰冻12h；c.将冰冻样品离心抽真空后，加入450μL pH7.29的0.1mol/L磷酸缓冲溶液，再加入50μL的5mmol/L DSS重水标准溶液，涡旋10s；d.所得混匀液经低温离心后，取上清液过0.22μm滤膜，滤液供核磁共振波谱分析。3)1H NMR测定条件：观察频率：600.13MHz；频率内锁：D2O；测定温度T：279.93K；谱宽sw：12019.23Hz；采样时间at：4.0s；脉冲延迟时间dl：1.0s；采样次数nt：32；脉冲宽度pw：10μs；脉冲序列：1H‑NOESY；混合时间mixT：0.1s。每次样本采集时间4mmin。4)1H NMR信号归属及代谢物鉴定：将测得的1H‑NMR自由感应衰减信号导入Chenomx NMR suit软件进行傅立叶转换，并输入DSS的浓度以及每个样本的pH值等信息。手动调整相位和基线，以DSS峰(0.00ppm)为基准校正谱图的化学位移，并进行反转卷积调整谱图峰形，数据积分后利用Chenomx数据库比对分析，获得代谢物种类及相应浓度。5)基于化学计量学方法的代谢组分比较与分析：使用SIMCA‑P+软件对归一化后的数据进行模式识别多变量分析，主成分分析使用中心化换算的数据标度换算方式，并通过得分图的形式进行菜用大豆物质组成区分。6)根据步骤4)图谱库检索的结果，挑选出70％以上样品共有峰，建立1HNMR指纹图谱共有峰数据库，对菜用大豆核磁共振图谱共有峰数据库进行聚类分析，判定菜用大豆品质类别。