[发明专利]一种支持CHO高密度悬浮培养的无血清无蛋白培养基

摘要

本发明提供了一种支持CHO高密度悬浮培养的无血清无蛋白培养基。公开了培养基组分包括氨基酸、微量元素及无机盐、维生素、碳水化合物和其他有机分子，其中含有类固醇激素，而不含有转铁蛋白和胰岛素。本发明所提供的培养基化学成分明确，无动物来源，污染风险小，能适用于多种不同CHO细胞株生长，细胞培养效果好，有利于下游分离和纯化。

主权项

1.一种支持CHO高密度悬浮培养的无血清无蛋白培养基，其特征在于，培养基组分包括，氨基酸、微量元素及无机盐、维生素、碳水化合物和其他有机分子，其中含有类固醇激素，而不含有转铁蛋白和胰岛素，其中，培养基干粉中各组分和用量如下，氨基酸的组分和用量，L‑精氨酸     arg             500 ～ 1000mg/lL‑天冬酰胺   asp             200 ～ 400mg/lL‑丙氨酸     ala             3 ～ 30mg/lL‑羟浦氨酸   HYPRO           50 ～ 150mg/LL‑半胱氨酸   CYS             80 ～ 120 mg/lL‑谷氨酸     GLU             250 ～ 350 mg/lL‑组氨酸     his             100 ～ 300mg/LL‑异亮氨酸   IIE             400 ～ 550 mg/lL‑甘氨酸     GLY             30 ～ 55 mg/lL‑天冬氨酸   ASN             80 ～ 160 mg/lL‑亮氨酸     leu             500 ～ 1000 mg/lL‑赖氨酸     lys             500 ～ 1000 mg/lL‑蛋氨酸     met             50 ～ 250 mg/lL‑苯丙氨酸   phe             200 ～ 400 mg/lL‑脯氨酸     pro             500 ～ 1000 mg/lL‑丝氨酸     SER             500 ～ 1000 mg/lL‑苏氨酸     thr             200 ～ 500 mg/lL‑色氨酸     trp             50 ～ 100 mg/lL‑酪氨酸     tyr             100 ～ 300 mg/lL‑缬氨酸     val             300 ～ 500 mg/l微量元素及无机盐的组分和用量，AlCl3·6H2O                  0.5 ～ 2.5mg/LAgNO3                        0.02 ～ 0.045mg/LCoCl2·6H2O                  0.05 ～ 0.3mg/LCuSO4·5H2O                  0.002 ～ 0.004mg/LKBr                         0.0005 ～ 0.0008mg/LFeSO4·7H2O                  0.5 ～ 1.5mg/LNa2SiO3                      0.005 ～ 0.045mg/LLiCl                        0.0005 ～ 0.001mg/LNiCl2·6H2O                  0.02 ～ 0.25mg/LSnCl2·2H2O                  2.00 ～ 8.00mg/LZnSO4·7H2O                  0.5 ～ 2.5mg/LCaCl2                                   20～50mg/LKCl                         200 ～ 500mg/LNaCl                        4000 ～ 6000mg/L柠檬酸铁                    20 ～ 100mg/L维生素的组分和用量，氢化可的松                  0.001 ～ 0.003 mg/L维生素C                     10 ～ 25mg/L ；维生素B6                    0.01 ～ 0.2mg/L维生素B12                   0.01 ～ 0.5mg/L生物素                      0.05 ～ 0.18mg/L叶酸                        0.02 ～ 8.00mg/L核黄素B2                    0.1 ～ 0.15mg/L氯化胆碱                    40 ～ 100 mg/L烟酰胺B3                    10 ～ 25mg/L泛酸钙                      2.0 ～ 8.5mg/L碳水化合物和其他有机分子的组分和用量，肌醇                        700 ～ 1000mg/L甲醇胺                      1.0 ～ 10.0 mg/L乙醇胺                      10.0 ～ 30.0 mg/L硫胺素（B1）                  5.0 ～ 20.0 mg/L还原型谷胱甘肽              0.5 ～ 2.5mg/L腺嘌呤                      5.5 ～ 8.5mg/L鸟嘌呤                      5.5 ～ 8.5mg/L尿嘧啶                      5.5 ～ 8.5mg/L胸腺嘧啶                    0.25 ～ 1.5mg/L胞嘧啶                      5.5 ～ 8.5mg/L核糖                        2.0 ～ 8.5mg/L脱氧核糖                    2.0 ～ 8.5mg/L酚红                        0.001 ～ 0.005mg/L地塞米松                    0.01～0.05mg/L孕酮                        2.0 ～ 8.5mg/L亚油酸                      0.05 ～ 0.50ul/L亚麻酸                      0.005 ～ 0.050ul/L硬脂酸                      0.005 ～ 0.050mg/L棕榈油酸                    0.05 ～ 0.50ul/L油酸钠                      0.005 ～ 0.050mg/L豆蔻酸钠                    0.005 ～ 0.050mg/L。