[发明专利]一种G因子的分离纯化方法

摘要

本发明公开一种G因子的分离纯化方法，其包括从鲎全血中分离提取血细胞步骤及将血细胞崩解后利用亲和层析法对鲎血细胞中包括G因子的各种血细胞成分进行初级分离纯化的步骤，其还包括对初级分离纯化所得的主要含G因子的合并组分进一步分离纯化的步骤，籍以制备去除凝固原的高纯度G因子组分。本发明的技术方案实现了对鲎资源的充分利用，同时克服了凝固原难以从G因子组分中除去的难题。

主权项

一种G因子的分离纯化方法，其包括从鲎全血中分离提取血细胞步骤及将血细胞崩解后利用亲和层析法对鲎血细胞中包括G因子的各种血细胞成分进行初级分离纯化的步骤，其特征在于：还包括对初级分离纯化所得的主要含G因子的合并组分进一步分离纯化的步骤，籍以制备去除凝固原的高纯度G因子组分；该进一步分离纯化的步骤为：第一步：制备ConA‑Sepharose琼脂糖凝胶柱，该ConA‑Sepharose琼脂糖凝胶柱规格为柱为Ф2×16cm，用含有pH=8.0、0.25 mol/L NaCl的20 mM Tris‑HCl溶液进行预平衡，接着以上述主要含G因子的合并组分作为样品上样；第二步：用0.5 mol/L NaCl溶液充分冲洗及0.5 mol/L甲基葡萄糖苷methyl‑α‑D‑glucoside溶液洗脱，该0.5 mol/L甲基葡萄糖苷methyl‑α‑D‑glucoside溶液用pH=8.0、20 mM Tris‑HCl ()溶液配制；第三步：收集第二步产生的洗脱液，用Amicon PM‑10超滤膜浓缩；第四步：收集第三步产生的浓缩液，用Sephacryl S‑200HR柱进一步提纯，该Sephacryl S‑200HR柱为Ф2.7×98cm，用pH 8.0、50mM Na3PO4缓冲液预平衡；第五步：收集第四步产生的高纯度G因子合并组分，用冷冻干燥机低温浓缩。