[发明专利]绵羊myostatin基因donor载体的构建方法及其应用无效
| 申请号： | 201310111824.1 | 申请日： | 2013-04-02 |
| 公开（公告）号： | CN103266124A | 公开（公告）日： | 2013-08-28 |
| 发明（设计）人： | 李万利;李文清;王二耀;徐照学;曹文广 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 |
| 主分类号： | C12N15/66 | 分类号： | C12N15/66;C12N15/63;C12N15/09 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种绵羊myostatin基因donor载体的构建方法及其应用。本发明的绵羊myostatin基因donor载体具有较强的针对性，主要是结合在第三外显子与第二内含子结合处造成双链DNA断裂，可提高同源重组的效率，进而使绵羊myostatin基因的第三外显子突变，进而获得绵羊myostatin基因的敲除。 | ||
| 搜索关键词： | 绵羊 myostatin 基因 donor 载体 构建 方法 及其 应用 | ||
【主权项】：
一种绵羊myostatin基因donor载体的构建方法，其包括如下步骤：以绵羊基因组DNA为模板，使用上游引物gggcccgtgacacggcagaggttttaat和下游引物进行PCR扩增；经PCR扩增出含有ApaI和BamHI酶切位点的同源左臂序列SEQ ID NO.1；以绵羊基因组DNA为模板，使用上游引物ggtaccaggtaacagacacaccaaaaag和下游引物gggcccctactaccatgcctggaatctt进行PCR扩增，经PCR扩增出含有KpnI和ApaI酶切位点的同源右臂SEQ ID NO.2；将同源左臂序列和含有同样酶切位点的骨架载体pEGFP‑C1分别进行BamHI单酶切，经凝胶回收后用T4连接酶进行连接，再经ApaI单酶切后，回收较大的片度进行T4连接酶连接，获得含有左臂的载体pEGFP‑C1‑L；将pEGFP‑C1‑L载体同带有KpnI和ApaI酶切位点的右臂分别进行KpnI和ApaI双酶切位，再经胶回收后，用T4连接酶连接，即完成绵羊myostatin基因载体的构建。
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