[发明专利]枸杞子中甜菜碱的含量测定方法

摘要

发明公开了一种枸杞子中甜菜碱的含量测定方法；以往的测量方法易受外界因素干扰、重现性差且不能完整保存甜菜碱中的有效成分；本发明由于采用DAD-HPLC法测定枸杞子中甜菜碱含量，通过对甜菜碱的峰面积响应值的线性关系、精密度、稳定性及加样回收率等方面的测定，从而掌握枸杞子中甜菜碱的含量的测定方法；本测定方法操作简单，准确度高、重复性好，值得在枸杞子甜菜碱含量测定方面推广应用；本发明广泛适用于各种中药材特别是枸杞子中的甜菜碱含量测定。

主权项

一种枸杞子中甜菜碱的含量测定方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）配制供试品溶液：A) 将枸杞子剪碎，取枸杞子碎未2g，置于回流瓶中，加入甲醇50ml，用瓶盖密封回流瓶，称定整体回流瓶重量，加热回流1h，得枸杞子溶液，放冷，再称整体回流瓶重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，量取过滤续滤液10ml待用；B）取粒度为100～200目的碱性氧化铝3g，放入内径为10～15mm的层析柱中，用乙醇20ml对碱性氧化铝进行预洗，将A步骤所制得的续滤液加入碱性氧化铝柱中，再用乙醇100ml进行洗脱，脱出枸杞子溶液中的有效成分，收集洗脱液，蒸干，加乙醇溶解并转移至5ml量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液待用；      （2）配制对照品溶液：C）称取甜菜碱对照品0.04328g放置10ml量瓶中，加乙醇进行溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为4.328mg/ml的对照品储备液备用；D）量取对照品储备液2ml放置25ml量瓶中，加乙醇进行稀释至刻度，摇匀，即得浓度为0.346mg/ml的对照品溶液备用；E）制备6个不同浓度的对照液样本      ①取2.5ml对照品溶液加乙醇稀释至5ml，浓度为0.173mg/ml；    ②取对照品溶液5ml，            浓度为0.346mg/ml；③取1ml储备液加乙醇稀释至5ml，浓度为0.866mg/ml；    ④取2ml储备液加乙醇稀释至5ml，浓度为1.731mg/ml；    ⑤取3ml储备液加乙醇稀释至5ml，浓度为2.597mg/ml；    ⑥取储备液5ml，                浓度为4.328mg/ml；（3）选用高效液相色谱仪、二极管阵列检测器及色谱检测软件配套使用，分别测定供试品溶液和对照品溶液中的甜菜碱的色谱分析图；（4）在设定色谱测定条件为：色谱柱规格为4.6 mm ×150 mm， 5 μm ，流动相设置为乙腈与0. 1%三乙胺混合液，流速设置为0. 6 mL/min ，检测波长设置为196 nm；柱温设置为25℃的条件下，对供试品溶液及6个不同浓度的对照液样本进行以下多种色谱分析测定:F）首先是线性关系的测定：分别量取供试品溶液及6个不同浓度的对照液样本各10ul，注入液相色谱仪，利用二极管阵列检测器，利用色谱检测软件按本色谱条件测定甜菜碱峰面积响应值；G）其次是精密度的测定：量取浓度为0.346mg/ml的对照品溶液，连续进样6次，量取供试品溶液进样一次，按本色谱条件测定甜菜碱峰面积响应值；H）再其次是稳定性的测定：分别取配制后0、1、3、5、10、15、25h后的浓度为0.346mg/ml的对照品溶液于分别进样，按本色谱条件测定峰面积响应值；I）最后是加样回收率的测定：量取5份浓度为0.1731mg/ml的对照液各0.5ml，分别加入浓度为0.2597mg/ml的对照液各1ml，测定峰面积响应值，计算回收率。