[发明专利]用生物反应器扩增肠道病毒71型的优化工艺方法

摘要

本发明涉及生物技术领域，特别是用于扩增肠道病毒71型时用到的一套优化的工艺方法。该方法以聚纤维纸片为载体利用生物反应器扩增非洲绿猴肾细胞，从而建立肠道病毒71型复制扩增的全套工艺流程。本方法建立在对肠道病毒71型复制扩增体系全面适应的条件下，在细胞培养阶段用含10%的血清的DMEM培养基，在病毒接种吸附后至24小时使用带3-5%的血清DMEM培养基，在收获病毒阶段采用无血清培养基添加0.5%的水解乳蛋白，同时每24小时补充2g/L的葡萄糖，该方法在减轻后期纯化难度并适应生物制品的要求的基础上，使优化工艺达到较高的病毒滴度。具有良好重复性、高效肠道病毒71型扩增工艺，可适用于任何以聚纤维纸片为载体的生物反应器扩增肠道病毒71型。

主权项

一种用生物反应器扩增肠道病毒71型的优化工艺方法，其特征在于该方法以聚纤维纸片为载体,利用生物反应器扩增非洲绿猴肾细胞，在细胞培养阶段用含10%的血清的DMEM培养基，培养细胞第六天换液成无血清培养基，吸附肠道病毒71型病毒2.5‑3.5小时，加入3‑5%胎牛血清，继续培养22小时，弃去全部培养液，并用磷酸缓冲液PBS冲洗去除血清，全部换成无血清培养基加0.5%水解乳蛋白，静止再吸附1.5‑2.5小时利于更多细胞均匀感染病毒，接种病毒后每24小时添加2g/L的葡萄糖,使优化工艺达到较高的病毒滴度。