[发明专利]一种改造已知载体多克隆位点的方法

摘要

本发明公开了一种改造已知载体多克隆位点的方法，即衔接子引物-PCR法，包括以下步骤：应用一对5’末端分别添加了多个限制性酶切位点的衔接子引物扩增任一物种中的已知DNA片段；用扩增片段两端的限制性内切酶双酶切，再用T4DNA连接酶将其连接至待改造载体的多克隆位点中；将连接产物转化感受态大肠杆菌，挑取阳性克隆，提取质粒，酶切验证改造的载体是否带有新的酶切位点，保留正确的质粒载体。本发明能在已知载体多克隆位点中快速、便捷的添加新的酶切位点，以满足具体实验的需要，成本低廉，灵活性高，可应用于改造已知载体多克隆位点。

主权项

一种改造已知载体多克隆位点的方法，即衔接子引物‑PCR法，其特征在于包括以下步骤：步骤一，设计衔接子引物，用衔接子引物对目标片段进行扩增；步骤二，利用原载体已知酶切位点分别对扩增片段与原载体进行双酶切，酶切后进行凝胶电泳，切胶后采用凝胶回收试剂盒回收目标片段，片段回收后通过T4 DNA连接酶进行连接反应；步骤三，连接产物转化大肠杆菌感受态细胞，挑取阳性克隆，提取质粒，验证新引入的酶切位点的正确性。