[发明专利]一种江西铅山红芽芋玻璃化法超低温保存脱毒的方法无效
申请号: | 201310133936.7 | 申请日: | 2013-04-06 |
公开(公告)号: | CN103262793A | 公开(公告)日: | 2013-08-28 |
发明(设计)人: | 洪森荣;尹明华 | 申请(专利权)人: | 上饶师范学院 |
主分类号: | A01H4/00 | 分类号: | A01H4/00 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 334001 *** | 国省代码: | 江西;36 |
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摘要: | 江西铅山红芽芋玻璃化法超低温保存脱毒的方法:(1)在显微镜下切取红芽芋单芽长约1mm的茎尖;(2)茎尖在MS+KT2mg/L+NAA0.5mg/L+0.75M蔗糖的固体培养基上预培养3d;(3)茎尖预培养后,采用60%PVS2在25℃脱水60min,再用100%PVS2在0℃脱水90min,更换新的PVS2后直接投入液氮;(4)保存后,茎尖在37℃水浴中化冻。化冻后用MS+KT2mg/L+NAA0.5mg/L+1.2M蔗糖的液体培养基洗涤3次,每次10min。洗涤后的茎尖先暗培养5d(温度为25℃)再转入正常的光周期下(光照时间14h/d,光强约1500-2000lx,培养温度25℃)培养,15d左右茎尖可发育成正常的芽;(5)将萌发的芽转入生根培养基1/2MS+NAA0.1~0.5mg/L中培养,即可得到红芽芋脱毒苗。本发明与现有技术比较,红芽芋试管苗的脱毒率高,而且茎尖取材大、操作简单方便。 | ||
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【主权项】:
江西铅山红芽芋玻璃化法超低温保存脱毒的方法,其特征在于有以下步骤:(1)在体视显微镜下切取江西铅山红芽芋单芽长约1mm的茎尖;(2)红芽芋茎尖在附加0.75M蔗糖的MS+KT2mg/L+NAA0.5mg/L固体培养基上预培养3d,培养条件为:光照时间14h/d,光强约1500‑2000lx,培养温度25±2℃;(3)红芽芋茎尖预培养后,采用60%的冰冻保护剂PVS2(30%(w/v)甘油+15%(w/v)乙二醇+15%(w/v)二甲基亚砜+0.4M蔗糖,pH5.8)在25±2℃脱水60min,再用100%PVS2在0℃脱水90min,更换新的PVS2后,直接投入液氮1d;(4)从液氮中取出后,茎尖在37℃水浴中化冻。化冻后用附加1.2M蔗糖的MS+KT2mg/L+NAA0.5mg/L液体培养基在25±2℃下洗涤3次,每次10min。洗涤后的茎尖先暗培养5d(温度为25±2℃)再转入正常的光周期下(光照时间14h/d,光强约1500‑2000lx,温培养度25±2℃)培养,半个月左右茎尖可发育成正常的芽;(5)将萌发的芽转入生根培养基1/2MS+NAA0.1~0.5mg/L中培养,即可得到江西铅山红芽芋脱毒苗,培养条件为:光照时间14h/d,光强约1500‑2000lx,培养温度25±2℃。
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