[发明专利]Thr-Pro-Pro-Thr四肽的液相合成方法

摘要

本发明涉及一种四肽的液相合成方法，具体的，本发明涉及四肽Thr‑Pro‑Pro‑Thr的液相合成方法，该四肽C端苏氨酸的羧基具有酰胺结构，N端为自由氨基。

主权项

1.四肽H‑Thr‑Pro‑Pro‑Thr‑NH₂的液相合成方法，包括以下步骤：1)苏氨酸羧基酰胺结构H‑Thr‑NH₂的合成：氨基叔丁氧羰基(Boc)或9‑芴甲氧羰基(Fmoc)保护的苏氨酸在‑15℃条件下，与氯甲酸异丁酯及N‑甲基吗啡啉作用，形成混合酸酐，再与氨水反应，生成羧基酰胺化的保护苏氨酸；然后用盐酸/有机溶剂或三氟乙酸(TFA)脱除Boc保护基，或者用哌啶/N,N‑二甲基甲酰胺(DMF)溶液脱除Fmoc保护基；2)二肽片段H‑Pro‑Thr‑NH₂的合成：Boc或Fmoc保护的脯氨酸在‑15℃条件下，与氯甲酸异丁酯及N‑甲基吗啡啉作用，形成混合酸酐，再与上步制备的羧基酰胺化的苏氨酸缩合反应，生成氨基保护的二肽；将反应液倒入纯水中，滤出析出物，干燥；然后用盐酸/有机溶剂或三氟乙酸(TFA)脱除Boc保护基，或者用哌啶/N,N‑二甲基甲酰胺(DMF)溶液脱除Fmoc保护基；将反应液倒入纯水中，通过弱碱或弱酸来调节溶液的PH值，使脱除保护基后的二肽从水中析出，过滤，洗涤，真空干燥，得到氨基自由的二肽片段H‑Pro‑Thr‑NH₂；3)Boc‑Thr(tBu)‑Pro‑OH二肽片段的合成：氨基Boc保护，侧链羟基叔丁醚保护或侧链无保护的苏氨酸在‑15℃条件下，与氯甲酸异丁酯及N‑甲基吗啡啉作用，形成混合酸酐，再与羧基甲酯保护的脯氨酸H‑Pro‑OMe反应，生成保护的二肽；然后用NaOH皂化反应脱除甲酯保护基；将反应液倒入纯水中，加酸调节溶液的PH值，使羧基自由的二肽从水中析出，过滤，洗涤，真空干燥，得到保护的二肽片段Boc‑Thr(tBu)‑Pro‑OH；4)四肽H‑Thr‑Pro‑Pro‑Thr‑NH₂的合成：保护的二肽片段Boc‑Thr(tBu)‑Pro‑OH在‑15℃条件下，与氯甲酸异丁酯及N‑甲基吗啡啉作用，形成混合酸酐，再与氨基自由的二肽片段H‑Pro‑Thr‑NH₂缩合，生成保护的四肽；然后用盐酸/有机溶剂或三氟乙酸(TFA)一次性脱除保护基；将反应液倒入纯水中，通过弱碱来调节溶液的PH值，使脱除保护基后的四肽从水中析出，过滤，洗涤，真空干燥，得到目标化合物四肽H‑Thr‑Pro‑Pro‑Thr‑NH₂。