[发明专利]一种针对合成基因定点突变修复的方法在审
| 申请号： | 201310141220.1 | 申请日： | 2013-04-22 |
| 公开（公告）号： | CN104109665A | 公开（公告）日： | 2014-10-22 |
| 发明（设计）人： | 李炳志;王霞;赵鹃;元英进 | 申请（专利权）人： | 天津大学 |
| 主分类号： | C12N15/11 | 分类号： | C12N15/11;C12N15/10 |
| 代理公司： | 天津市北洋有限责任专利代理事务所 12201 | 代理人： | 陆艺 |
| 地址： | 300072*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种针对合成基因定点突变修复的方法，包括以下步骤：（1）根据基因定点突变的碱基位置设计包含修复位点的正、反向引物；（2）以含有突变基因的质粒为模板，加入正、反向引物，在高保真DNA聚合酶的作用下进行环状延伸PCR；（3）采用DpnI酶将琼脂糖凝胶电泳检测正确的步骤（2）产物进行酶切，去除质粒模板得到具有修复位点的带有缺刻的开环质粒；转化大肠杆菌感受态细胞，挑选转化子测序验证。本发明的方法正向引物、反向引物设计简便，扩增效率高；引物与模板的结合效率高，目的条带易得；修复成功率高。不需胶回收、无需连接与筛选，是一种简便可行、成功率高、节约时间、降低成本的针对合成基因定点突变修复的方法。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 针对 合成 基因 定点 突变 修复 方法 | ||
【主权项】：
一种针对合成基因定点突变修复的方法，其特征在于包括以下步骤：（1）根据基因定点突变的碱基位置设计包含修复位点的正向引物和反向引物；（2）以含有突变基因的质粒为模板，加入步骤（1）合成的正向引物和反向引物，在高保真DNA聚合酶的作用下进行环状延伸PCR；（3）采用DpnI酶将琼脂糖凝胶电泳检测正确的步骤（2）产物进行酶切，去除质粒模板得到具有修复位点的带有缺刻的开环质粒；转化大肠杆菌感受态细胞，挑选转化子测序验证。
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