[发明专利]一种三角帆蚌外套膜组织切片的制备方法

摘要

本发明公开了一种三角帆蚌外套膜组织切片的制备方法，包括对三角帆蚌的外套膜组织进行固定、上行梯度乙醇脱水、透明、浸蜡、包埋、连续切片、烘烤、脱蜡、下行梯度乙醇复水，对切片组织进行苏木精-伊红染色后用中性树脂封片等步骤。本发明制备的组织切片可以用于观察外套膜的组织学特征，也可用于检测贝壳形成相关基因在三角帆蚌外套膜各位置的表达；本发明方法可以保证外套膜各层组织和细胞位置的相对固定；较一般常规组织切片制作方法不仅节省时间，而且克服了常规方法制作出的外套膜组织切片组织破碎的问题，重复性较好。

主权项

一种三角帆蚌外套膜组织切片的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将三角帆蚌外套膜组织浸泡于4%多聚甲醛溶液中进行固定；（2）将固定好的外套膜组织用1×PBS冲洗后，经上行梯度乙醇脱水，然后经透明、浸蜡、包埋、连续切片得到切片，再贴片于经多聚赖氨酸处理的载玻片上，40℃恒温箱烤片过夜，备染；（3）烤好的切片用二甲苯脱蜡两次，每次均是脱蜡10 min，然后进行下行梯度乙醇复水，并用蒸馏水浸泡2 min；（4）将复水后的切片放入苏木精中染色20～30 min，用自来水冲洗20 min后，放入1%（体积百分含量）盐酸乙醇溶液中分化褪色3 s；（5）将步骤（4）中得到的切片再放入自来水流水中漂洗20 min，然后分别经过乙醇脱水Ⅰ、0.5%（质量百分含量）伊红乙醇溶液复染1 min、乙醇脱水Ⅱ；（6）将步骤（5）中得到的切片用二甲苯透明两次，每次均是透明5 min，最后用中性树脂封片。