[发明专利]一种提高粳稻花药培养愈伤组织诱导率和绿苗分化率的方法

摘要

本发明涉及一种水稻花药培养改良技术，具体涉及一种提高粳稻花药培养愈伤组织诱导率和绿苗分化率的方法。该方法通过取样前用10%的多效唑可湿性粉剂200g/667m2兑水50～60L进行了喷雾处理，喷施多效唑和低温处理使得花药内大量的花粉细胞处于单核靠边期，并在愈伤组织诱导培养基中引进了新型的细胞分裂素4-FA，在4-FA和KT、2,4-D的协同作用下，接种后暗培养易启动分裂，大大提高了愈伤组织诱导率。通过利用这一花药培养方法，粳稻花药培养的愈伤组织诱导率获得显著提高，均超过85.0%；而分化培养基组成成分：MS基本培养基+NAA0.5mg/L+ZT0.5mg/L+TDZ0.8mg/L+4-FA0.2mg/L+MET2.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉8g/L，引进了新型激素ZT、4-FA和TDZ以后，光照培养，绿苗分化率能达到86%以上。

主权项

一种提高粳稻花药培养愈伤组织诱导率和绿苗分化率的方法，其特征是：按如下步骤进行：（1）前处理：选取粳稻品种徐稻5号为材料，叶枕平前5‑7天，用10%的多效唑可湿性粉剂200g/667m2，兑水50～60L喷施植株；（2）取样及取样后处理：待叶枕距3‑5cm时取幼穗，5‑8℃处理5‑8天；（3）愈伤诱导：挑取花药接种至愈伤诱导培养基：改良N6培养基+KT0.5mg/L+2,4‑D2.0mg/L+4‑FA0.4mg/L+蔗糖60g/L+琼脂粉8.0g/L；培养基灭菌前调pH值：5.9‑6.0，25±1℃暗培养；（4）分化培养：待愈伤增大至1‑2mm，转至分化培养基：MS基本培养基+NAA0.5mg/L+ZT0.5mg/L+TDZ0.8mg/L+4‑FA0.2mg/L+MET2.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉8g/L，培养基灭菌前调pH值：5.9‑6.0；在温度25±1℃、光照14小时/天条件下培养；（5）植株再生后转入生根培养基，23±1℃、光照14小时/天条件下继代培养。