[发明专利]一种用于表征外周调节性T细胞抑制活性的特征细胞群的检测方法及其应用

摘要

本发明涉及医药领域，特别是涉及一种用于表征外周调节性T细胞抑制活性的特征细胞群的检测方法及其应用，更为具体的说是涉及一种用于表征外周调节性T细胞抑制活性的特征细胞群的检测方法及其在用于制备调节性T细胞抑制活性检验试剂盒中的应用、以及在用于制备筛选胰腺早期病变靶标的试剂盒中的应用。否定了外周免疫调节细胞群与它应具备的调节功能间存在矛盾，免疫调节细胞的数量高低与它应该发挥的作用无关的业内普遍理论，找到了一组对调节性T细胞抑制活性具有表征价值的细胞群，并进一步公开了相应的细胞群检测方法，从而对调节性T细胞抑制活性，以及筛选胰腺早期病变靶标奠定了重要的基础。

主权项

一种用于表征外周调节性T细胞抑制活性的特征细胞群的检测方法，其特征是该方法包括以下步骤：步骤1）将待测样本处理，形成单细胞悬液；步骤2）特征细胞群的抗体染色：将上述单细胞悬液分别与荧光抗体CD3、CD4、CD69混合；步骤3）混合液以流式细胞洗液调匀，加入细胞破膜裂解液，混匀冰上孵育30分钟，再用细胞破膜辅液，充分混匀后离心，去上清；步骤4）新鲜配制脱氧核糖核酸酶液，加入到步骤4）中所得沉淀中，混匀后孵育60分钟，再用细胞破膜辅液，充分混匀后离心，去上清，步骤5）加入抗体Fc阻断剂，充分作用20分钟；步骤6）分别加入检测标记调节细胞表位的转录因子（FoxP3）和脱氧核糖核酸复制（BrdU）的抗体； 所述的BrdU、FoxP3分别采用不同荧光标记，分取1.5μl抗体冰上孵育30分钟，再用细胞破膜辅液200μl，洗涤细胞悬液，充分混匀后离心，去上清；步骤7）流式细胞仪检测：加入流式细胞洗液500ml，充分混匀后离心，去上清，加入流式细胞洗液，流式细胞仪上机检测。